口腔种植修复由于自身无以伦比的优点,已被越来越多国人所接收和采用。但由于各种原因引起的患者骨质和骨量的不足不仅大大增加了修复的治疗时间和治疗成本,也严重制约了口腔种植修复适应症的选择。我国中医在增加骨量,改善骨的结构,促进骨的合成和矿化沉积方面,有着已沿用多年的成熟复方合剂。近年来,有人将这些合剂用于口腔种植修复的实验研究,发现其可以一定程度上加速种植后的骨整合的速度。本研究拟通过体内、外试验探寻中药合剂在骨修复重建中的作用机理：观察其分别对骨髓干细胞的分化、成骨细胞和破骨细胞的增殖的作用、以及在蛋白表达、信号传递通路等情况,并用micro-ct等方法定性、定量检测中药合剂加速种植体骨整合情况。第一部分体外试验实验一：补肾中药合剂促进成骨细胞增殖的体外实验研究目的：检测含补肾中药合剂血清对体外培养的人成骨细胞(hFOB1.19)增殖的影响。方法：通过MTT分别评估低和高剂量含补肾中药血清中成骨细胞分化与增值的能力,BrdU标记法来评估药物血清对细胞增殖的影响。结果：人成骨细胞在含补肾中药血清中培养24小时后细胞活力与对照组比较显著增加,有统计学意义(p<0.05)；延长培养时间到48小时后细胞生长活力进一步增强(p<0.05)。结论：含补肾中药合剂血清可明显促进成骨细胞的增殖。实验二：中药合剂促进成骨细胞增殖与功能的机制研究目的：探讨补肾中药合剂对体外培养的人成骨细胞(hFOB1.19)增殖和功能影响的分子机制。方法：分别对低剂量、高剂量补肾中药血清和5%空白对照组血清培养的成骨细胞进行碱性磷酸酶测试,并通过酶联免疫吸附实验分别检测其成骨细胞骨钙素的分泌量。采用蛋白质印迹法分析补肾中药合剂含药血清对骨保护素、骨桥蛋白和核因子κB受体活化因子配体蛋白表达水平的影响。结果：补肾中药合剂含药血清能提高hFOB1.19细胞中碱性磷酸酶的活性；在作用96小时后,能促进hFOB1.19细胞分泌骨钙素,均具有剂量依赖关系；在蛋白表达水平上,补肾中药合剂含药血清能明显上调人成骨细胞的骨保护素、骨桥蛋白表达,并抑制其NF-κB受体活化因子配体的表达。结论：补肾中药合剂含药血清可促进成骨细胞的生长分化和成骨情况,其机制可能与影响OPG/RANK/RANKL骨代谢信号调节系统有关。第二部分体内试验实验三：补肾中药合剂促进牙种植体骨整合的组织病理学评估目的：用组织病理学方法评估补肾中药合剂对牙种植骨整合的效果；方法：12只兔子随机分成二组,均在其胫骨顶端植入纯钛种植体,一组饲料中加入补肾中药合剂,另一组饲料中没加入任何药物,30天、60天、90天后处死免子,分别用组织病理学及骨组织形态计量学方法评估种植体骨整合的情况；结果：试验组的病理学结果及骨组织形态计量学参数情况明显优于对照组；结论：补肾中药合剂能促进种植体骨整合。实验四：补肾中药合剂促进牙种植体骨整合的影像学评估目的：用影像学方法评估补肾中药合剂对牙种植骨整合的效果；方法：12只兔子随机分成二组,均在其胫骨顶端植入纯钛种植体,一组饲料中加入补肾中药合剂,另一组饲料中没加入任何药物,30天、60天后处死免子,分别用影像学方法评估种植体骨整合的情况；结果：试验组的影像学结果如X光片、CT显示成骨效果明显优于对照组；结论：补肾中药合剂能促进种植体骨整合速度。实验五：补肾中药合剂促进牙种植体骨整合的免疫组化学评估目的：用免疫组化学方法评估补肾中药合剂对牙种植骨整合的效果；方法：12只兔子随机分成二组,均在其胫骨顶端植入纯钛种植体,一组饲料中加入补肾中药合剂,另一组饲料中没加入任何药物,30天、60天、90天后处死免子,分别用免疫组化学方法评估种植体骨整合的情况；结果：试验组的免疫组化学结果显示：30天对照组、实验组种植体附近OPG、 OPGL、 COX-2均见中度阳性表达；60天对照组、实验组种植体附近OPG、 OPGL见中度阳性表达,而COX-2弱阳性表达；90d对照组、实验组种植体附近OPG、 OPGL、 COX-2均见弱阳性表达；结论：补肾中药合剂能促进种植体骨整合。