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研究背景:恶性实体肿瘤在生长过程中由于肿瘤细胞的快速生长,使得血管的生长呈现相对滞后性,因此肿瘤细胞本身多处于不同程度的缺氧状态。神经母细胞瘤早期出现远处转移,其转移机制仍不明确。上皮-间质转化(EMT)是癌细胞在缺氧微环境下发生转移的主要途径,但目前关于这一机制与神经母细胞瘤的关系这方面研究较少。目的:探索上皮-间质转化机制是否与缺氧环境下神经母细胞瘤发生转移有关,并明确其相关分子变化。方法:1)随机选取非转移性神经母细胞瘤(Ⅰ期)、未化疗的转移性神经母细胞瘤(Ⅲ-Ⅳ期)、神经节细胞瘤各5例,将这三种实体肿瘤标本的石蜡切片用免疫组化的方法检测E-cadherin与N-cadherin的表达变化。2)将人神经母细胞瘤细胞株SK-N-SH置入缺氧培养箱(1%O2,94%N2,5%CO2),建立肿瘤缺氧微环境并观察细胞形态、通过检测Caspase3/7及CCK-8检测凋亡与增殖等基本细胞生物学变化。3)Transwell试验比较常氧与缺氧环境下肿瘤细胞的侵袭性变化4)Real time-PCR及Western blot分别检测常氧及缺氧环境下EMT系列基因表达的变化结果:1)免疫组化结果显示:E-cadherin在转移性神经母细胞瘤中的表达明显低于I期神经母细胞瘤及神经节细胞瘤(P=0.002,0.001),N-cadherin在转移性神经母细胞瘤的表达明显高于I期神经母细胞瘤及神经节细胞瘤(P=0.031,0.01)2)与常氧组相比较,缺氧72h肿瘤细胞形态无明显差异,凋亡明显减少(P=0.01),有加快增殖趋势,但差异不明显(P=0.061)。缺氧48h后VEGF表达明显增加(P=0.042)3)Transwell实验显示缺氧24h后肿瘤细胞侵袭性增加(P=0.038)4)缺氧24h内E-cadherin表达明显降低(P=0.011),提示出现EMT变化,其他明显表达增加的有N-cadherin(P=0.008)和Snail(P=0.023),Fibronectin表达降低(P=0.002),而Twsit和Vimentin表达无明显差异(P=0.122,0.093)结论:1)上皮-间质转化是神经母细胞瘤发生早期转移的机制之一。2) E-cadherin、N-cadherin、Snail、Fibronectin在缺氧24h内均有明显的表达变化。