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雄性生殖能力对动物繁殖和养殖业至关重要。睾丸作为雄性动物重要的生殖器官,具有产生精子和分泌雄激素的功能。这一复杂过程的完成需要多种蛋白质相对精确协调地表达和调控。因此,应用蛋白质组学方法来探索睾丸中蛋白质的组成具有重要意义。本研究以绵羊睾丸为实验材料,首先建立和优化绵羊睾丸蛋白质组学双向电泳体系;之后应用蛋白质组学、质谱和生物信息学技术比较分析了不同发育阶段绵羊睾丸蛋白质组成和表达的差异情况;最后应用q RT-PCR、Western blot和免疫组化方法对不同发育期绵羊睾丸中部分差异蛋白质表达情况进行验证。主要研究结果如下:1.绵羊睾丸蛋白质双向电泳体系的建立及优化应用17 cm p H 3—10的非线性IPG胶条进行双向电泳,比较了蛋白不同提取方法、上样量、聚焦时间和分离胶浓度对绵羊睾丸蛋白质双向电泳的影响。结果表明,三氯乙酸(TCA)/丙酮沉淀法提取绵羊睾丸组织总蛋白获得的蛋白点最多,上样量750μg,聚焦时间75000 Vh或更高,12%分离胶对分离后的2-DE图谱较好。采用优化后的条件,可以得到蛋白点数多、背景清晰的2-DE图谱。2.不同发育期绵羊睾丸蛋白质组学研究应用2-DE技术对绵羊5个不同发育期(0、2、5、12和24月龄)睾丸蛋白质进行检测,分别检测到382、522、567、596和671个蛋白点。应用PDquest 8.0图像分析软件共筛选出45个差异蛋白点,经过MALDI-TOF-TOF质谱鉴定,最终成功鉴定出37种蛋白质。使用Blast2GO对每一种蛋白质的生物学过程、细胞组成和分子功能进行详细注释,这些蛋白质主要参与了―细胞过程和单有机体过程‖、―细胞和细胞器组成‖及―结合和催化活性‖。3.绵羊睾丸差异蛋白质的验证应用q RT-PCR方法对15个蛋白质在绵羊睾丸5个不同发育期的转录水平进行检测,其中6个基因与蛋白水平的表达趋势一致,9个基因与蛋白水平的表达趋势不一致。应用Western blot和免疫组化方法对4个蛋白质进行检测,其表达趋势与2-DE结果一致。