本研究以‘乌龙岭’龙眼叶片为材料,采用RT-PCR和RACE技术,克隆出查尓酮合成酶(CHS )和查尔酮异构酶(CHI )基因,以及脱氢抗坏血酸还原酶(DHAR )cDNA的全长。黄酮类化合物合成关键酶基因的克隆为进一步利用基因工程技术开发黄酮类化合物奠定分子生物学基础。DHAR基因全长的克隆为进一步从分子水平了解植物抗坏血酸氧化还原系统和抗逆作用机制奠定理论基础。1利用RT-PCR和RACE技术克隆龙眼叶片CHS基因全长龙眼叶片CHS基因cDNA全长为1298 bp(GenBank登录号为JF718282),开放阅读框为1200 bp,编码393个氨基酸,分子量42.947 kD,等电点5.90。将龙眼叶片CHS全长经过BLAST软件比对,该序列与荔枝CHS基因的同源性较高,为96 %;其次与白鲜、银白杨、毛果杨、甜橙、芸香同源性也比较高,分别为83%、81%、80%、80%、80%;并对其氨基酸序列进行比对发现,龙眼叶片的CHS蛋白与荔枝、白鲜、银白杨、葡萄、甜橙、沉香同源性也比较高,均达98%以上。经保守区功能区的分析,推导出CHS蛋白拥有两个保守区域, CHS-like酶家族和CHS酶家族区域。CHS蛋白序列经跨膜和二级结构的预测,发现有一个跨膜区域,位于365~382位,蛋白结构主要以螺旋和线状结构为主。2利用RT-PCR和RACE技术克隆龙眼叶片CHI基因全长龙眼叶片CHI基因cDNA全长为1011 bp(GenBank登录号为JF718281),开放阅读框为743 bp,编码246个氨基酸,分子量26.841 kD,等电点5.22。将龙眼叶片CHI全长经过BLAST软件比对,该序列与荔枝CHI基因的同源性较高,为98 %;其次与蜜柑、甜橙、柚子、西洋梨、沙梨同源性也比较高,分别为82%、82%、81%、79%、80%;并对其氨基酸序列进行比对发现,龙眼叶片的CHI蛋白与沙梨、金花茶、狐臭葡萄、文旦柚、毛果杨、牡丹同源性也比较高,同源性在87% ~92%之间。经保守区功能区的分析,推导出CHI蛋白拥有一个保守区域,查尔酮超级家族区域。CHI蛋白序列经跨膜和二级结构的预测,发现位于此段CHI的cDNA序列没有明显的跨膜结构,蛋白结构主要以螺旋和线状结构为主。3利用RT-PCR和RACE技术克隆龙眼叶片DHAR基因全长龙眼叶片DHAR基因cDNA全长为1038 bp(GenBank登录号为JF718283),开放阅读框为552 bp,编码183个氨基酸,分子量20.584 kD,等电点5.29。将龙眼叶片DHAR全长经过BLAST软件比对,该序列与毛果杨DHAR基因的同源性较高,为79 %;其次与苹果、甘蓝、芥菜、拟南芥、马铃薯同源性也比较高,分别为78%、78%、78%、77%、77%;并对其氨基酸序列进行比对发现,龙眼叶片的DHAR蛋白与苹果、水稻、毛果杨、玉米须、蓖麻、拟南芥同源性也比较高,均达99%。经保守区功能区的分析,推导出DHAR蛋白拥有两个保守区域, GST_C_DHAR超级家族和GST_N家族区域。DHAR蛋白序列经跨膜和二级结构的预测,发现位于此段DHAR的cDNA序列没有明显的跨膜结构,蛋白结构主要以螺旋结构为主。