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临床肿瘤治疗失败的主要原因之一是肿瘤发生侵袭和转移,怎样才能阻断肿瘤的转移已成为肿瘤治疗的基础和临床研究的热点课题之一。近几十年来,大量研究结果证实肿瘤的增殖、侵袭和转移与肿瘤的血管新生（angiogenesis）密切相关,这一发现极大的促进了该领域的研究开展。近些年来,随着血管新生相关机制研究的深入,使得通过抑制肿瘤血管新生来抑制肿瘤生长的理念得到越来越多基础和临床研究的证明。VEGF被认为是在血管生成过程中起中枢调节作用的因子,它通过促进血管新生从而促进肿瘤生长和转移。现已发现的VEGF受体包括VEGFR-1、-2、-3和NRP-1、NRP-2,其中VEGFR-2（Kinase insertdomain-containing receptor,KDR）作为血管内皮细胞生长因子主要受体之一,在内皮细胞增殖、迁移、分化、微管形成、血管通透性增加中发挥重要作用。KDR属酪氨酸蛋白激酶第Ⅲ亚型,它的胞外区包括7个免疫球蛋白样结构域,其中区域Ⅱ和区域Ⅲ对与VEGF的相互作用贡献较大。缺失区域Ⅲ会引起KDR与VEGF结合的亲和力下降1000倍,因此说明区域Ⅲ尽管未必直接参与结合配体,但在VEGF/KDR相互作用中发挥关键作用。我们将含有KDR胞外Ⅲ区基因质粒（含有碱性磷酸酶（phoA）启动子和引导肽stⅡ的分泌型表达载体pAYZ）,在大肠杆菌16C9中获得了高效分泌可溶性表达。采用三角瓶摇瓶培养。表达产物经抗E-tag亲和层析纯化,获得纯度90%以上的KDR胞外Ⅲ区融合蛋白。随后,基于上述表达出的KDR胞外Ⅲ区融合蛋白,按照常规制备杂交瘤的方法,我们制备出一株能稳定分泌抗KDR胞外Ⅲ区单克隆抗体的杂交瘤细胞株YcomlD3。体外生物活性研究表明,该单克隆抗体不仅可与可溶性KDR胞外Ⅲ区蛋白抗原以及细胞表面表达的KDR结合,还可竞争性抑制VEGF165与可溶性KDR胞外Ⅲ区蛋白抗原的结合,具有潜在的抗肿瘤血管新生临床应用价值。为克服鼠源性单抗自身固有的一些缺陷,我们借助基因重组的方法,构建出其相对应的Fab样基因工程抗体,即通过采用通用简并性引物,成功克隆了抗KDR单克隆抗体YcomlD3轻、重链可变区基因,尔后,将VL、VH基因分别克隆到含有人IgG1 CL和CH1的中间载体pB11和pB12上,然后再通过酶切将获得的VL+CL和VH+CH1基因重组到载体pA19,构建成抗KDR Fab样抗体片段表达载体pAYZKDRFab,并在大肠杆菌中获得了表达。ELISA实验表明该基因工程抗体保留了亲本单克隆抗体的特异性结合活性,并可竞争性抑制VEGF165与可溶性KDR胞外Ⅲ区蛋白抗原的结合,具有潜在的抗肿瘤血管新生临床应用价值。