【摘 要】
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黄瓜(Cucumis sativus L.,2n=14)是一种深受人们喜爱、种植范围广泛的世界性蔬菜,具有较高的营养和经济价值。目前,我国是黄瓜产量最大的国家,但是黄瓜生产过程中遭遇到的各种胁迫,严重影响其产量及品质。其中,随着温室气体的排放量增加,全球气候不断变暖,高温胁迫成为危害黄瓜生产的重要原因之一。热激转录因子(Heat shock transcription factor,HSF)是植物
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黄瓜(Cucumis sativus L.,2n=14)是一种深受人们喜爱、种植范围广泛的世界性蔬菜,具有较高的营养和经济价值。目前,我国是黄瓜产量最大的国家,但是黄瓜生产过程中遭遇到的各种胁迫,严重影响其产量及品质。其中,随着温室气体的排放量增加,全球气候不断变暖,高温胁迫成为危害黄瓜生产的重要原因之一。热激转录因子(Heat shock transcription factor,HSF)是植物中参与高温胁迫响应的主要转录因子家族之一,在植物耐热性中发挥着不可替代的作用。本研究克隆了黄瓜HSF家族基因CsHSFA1,通过遗传转化的方式对其功能进行解析,并对其下游靶基因所在的基因家族进行了成员鉴定、结构预测及潜在功能的分析,具体结果如下:1.生物信息学分析表明,CsHSFA1位于黄瓜3号染色体上,共编码518个氨基酸;预测其蛋白分子量为56.99939 k Da,等电点为5.04;其蛋白中含有核定位信号、转录激活AHA基序以及HSF结构域;二级结构预测显示CsHSFA1蛋白中含有31.27%的α螺旋、12.93%的延伸链以及55.79%的无规则卷曲;亚细胞定位预测CsHSFA1蛋白定位于细胞核中。2.通过亚细胞定位试验证实CsHSFA1蛋白定位于细胞核中;酵母试验表明CsHSFA1具有转录激活活性;对CsHSFA1基因在黄瓜各组织中的表达模式分析发现:CsHSFA1基因在根、茎、叶、卷须、雄花、雌花、子房等组织中均有表达,但在子房中的表达量较高。3.为了探究CsHSFA1基因的功能,本研究构建了CsHSFA1过表达载体并瞬时转化黄瓜子叶。通过在黄瓜子叶中瞬时过表达CsHSFA1基因,发现过表达CsHSFA1可以提高高温条件下黄瓜子叶中SOD、POD和CAT三种抗氧化酶的活性以及减少MDA的产生。4.为了进一步探究CsHSFA1基因的功能,本研究在拟南芥中过表达CsHSFA1基因,发现过表达株系OE-10、OE-16、OE-24的种子萌发速率显著快于WT,过表达植株根长显著增加。对野生型植株WT及过表达植株进行高温处理后,发现过表达株系的死亡率显著低于WT,叶片中抗氧化酶的活性显著高于WT,MDA含量显著低于WT。以上结果说明CsHSFA1参与了黄瓜生长发育的调控及耐热性的提高。另外,本研究还构建了CsHSFA1敲除载体,正转化黄瓜以期对CsHSFA1基因的功能进行验证。5.通过酵母单杂交试验发现CsHSFA1可以结合CsDREB2A的启动子,说明CsDREB2A极有可能作为CsHSFA1的下游基因在黄瓜耐热性中发挥作用。6.为了探究DREB基因在黄瓜中的潜在功能,本研究对黄瓜中的DREB基因进行鉴定。结果表明,黄瓜DREB家族共包含55个成员,且都含有其家族的特征结构域:AP2结构域;55个DREB基因不均匀地分布在黄瓜7条染色体上;对其基因结构进行分析发现DREB基因几乎不含有UTRs和内含子;在CsDREBs基因启动子区域含有多种非生物胁迫及激素响应元件;通过分析公共转录组数据发现,CsDREBs基因可能参与高温胁迫、盐胁迫、霜霉病胁迫及白粉病胁迫的响应。
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