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目的：研究8-溴-7-甲氧基白杨素(8-bromo-7-methoxychrysin, BrMC)对人肝癌SMMC-7721细胞系肝癌干细胞(liver cancer stem cells, LCSCs)自我更新、上皮-间叶样表型转化(Epithelial-mesenchymal transition, EMT)、侵袭性和致瘤性的影响,并初步探讨其作用机制,为肝癌的药物治疗提供新的思路和理论依据。方法：1.肝癌干细胞的分离及鉴定研究：体外培养人肝癌SMMC-7721细胞系细胞,以CD133免疫磁珠分选法从SMMC-7721细胞系分选得到CD133+细胞,以干细胞条件培养基悬浮培养富集法富集并扩增CD133+肝癌球形成细胞。采用藻红蛋白(PE)荧光标记CD133流式细胞术分析CD133阳性细胞百分率；肿瘤球形成试验测定自我更新能力；裸鼠皮下成瘤实验检验致瘤性。2. BrMC抑制源自SMMC-7721细胞系CD133+肝癌球形成细胞干细胞特性的研究：体外培养SMMC-7721细胞及CD133+肝癌球形成细胞。设置溶媒对照组(0.1%DMSO)和BrMC处理组(0.1、0.3、1.0μmol/L),药物处理24-72h。采用光学显微镜观察细胞形态；四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖活性；二次肿瘤球形成试验测定自我更新能力；PE荧光标记CD133流式细胞术分析CD133阳性表达率；Western Blot分析干细胞标志物CD44、上皮细胞标志物E-钙粘蛋白(E-cadherin,E-cad)、紧密连接蛋白(zonula occluden-1,ZO-1)、间质细胞标志物N-钙粘蛋白(N-cadherin,N-cad)和波形蛋白(vimentin)的表达;Transwell小室侵袭试验分析体外细胞侵袭能力；原代接种裸鼠移植瘤模型治疗实验和二次裸鼠皮下成瘤实验评价体内治疗效果。3.BrMC靶向CD133+肝癌球形成细胞干细胞特性机制的研究：体外培养SMMC-7721细胞及CD133+成球细胞。设置溶媒对照组(0.1%DMSO)和BrMC处理组(0.1、0.3、1.0μmol/L),药物处理24-72h。Western Blot分析Twist、β-catenint、Akt、p-Akt、Snail蛋白表达；Twist特异性小干扰RNA转染SMMC-7721细胞及CD133+成球细胞沉默Twist的表达；RT-PCR检测转染后Twist基因mRNA表达；肿瘤球形成实验测定自我更新能力。结果：1.CD133免疫磁珠分选法得到的源自SMMC-7721细胞系CD133+细胞在干细胞条件培养基悬浮培养条件下非锚定悬浮生长,CD133+肝癌成球细胞CD133+阳性表达率提高；具有自我更新能力及高致瘤性。2.BrMC抑制人肝癌SMMC-7721细胞系CD133+肝癌球形成细胞增殖、自我更新、EMT、侵袭、干细胞标志蛋白CD133和CD44表达、原代皮下接种裸鼠移植瘤生长、二次裸鼠皮下移植瘤形成和生长的作用。3.BrMC下调人肝癌SMMC、7721细胞系CD133+肝癌球形成细胞Twist、β-catenin、Snail蛋白表达以及降低磷酸化Akt蛋白水平；Twist特异性siRNA转染下调LCSCs Twist表达、β-catenin、Snail蛋白表达以及下降Akt磷酸化水平；抑制自我更新能力；BrMC增强Twist特异性siRNA下调LCSCs Twis、β-catenin、Snail以及磷酸化Akt蛋白表达和抑制自我更新能力作用。结论：1.联合CD133免疫磁珠分选法和干细胞条件培养基悬浮培养富集法获得的人肝癌SMMC-7721细胞系CD133+肝癌球形成细胞具有CSCs功能和特性。2. BrMC具有抑制源自SMMC-7721细胞系CD133+肝癌球形成细胞即肝癌干细胞功能和特性的作用。3. BrMC通过抑制Twsit蛋白表达,下调β-catenin表达,灭活Akt,抑制SMMC-7721细胞系LCSCs特性。