【摘 要】
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目的:恶性黑素瘤是最具危险性的一种皮肤肿瘤,多药耐药是其临床治疗失败的主要原因,化疗药物的主要作用之一是诱导肿瘤细胞凋亡,而抗凋亡基因的过度表达使化疗药物不能发挥其
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目的:恶性黑素瘤是最具危险性的一种皮肤肿瘤,多药耐药是其临床治疗失败的主要原因,化疗药物的主要作用之一是诱导肿瘤细胞凋亡,而抗凋亡基因的过度表达使化疗药物不能发挥其诱导凋亡的作用,致使恶性黑素瘤临床治疗反应不佳预后差,死亡率居高不下。BCL-2 (B-cell lymphoma-leukemia 2)基因家族起调节凋亡的作用,其家族成员在结构上具有同源性,哺乳动物细胞中目前已确定了至少15名成员。虽然结构相似,但在功能上却可分为促凋亡的基因和抑制凋亡的基因。Mcl-1基因又称髓样细胞白血病-1(myeloid cell leukemia-1,Mcl-1),是BCL-2家族中的一员,功能上属于抗凋亡的BCL-2亚家族。反义技术因其高效、特异、合成简便的特点,正逐渐成为人们研究肿瘤发病机制及基因治疗肿瘤等的重要研究方法。本实验通过脂质体辅助转染MCL-1反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,AS-ODN),同时联合作用化疗药物,以观察抑制抗凋亡基因的表达对恶性黑素瘤细胞化疗耐药性的影响。方法:培养恶性黑素瘤细胞WM451,在阳离子脂质体的辅助下转染MCL-1的反义寡核苷酸利用逆转录聚合酶链式反应(Reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)的方法观察转染前后MCL-1基因表达情况;免疫组化及Western Blot法检测肿瘤细胞转染前后MCL-1的蛋白表达情况。电镜检测转染后凋亡细胞形态。流式细胞仪测定转染后细胞的凋亡率。MTT法检测肿瘤细胞对化疗药物的敏感性及IC50的变化。结果:转染MCL-1 AS-ODN后2小时,mRNA的表达减少75%,转染后4小时,蛋白的表达减少了62%。转染MCL-1 AS-ODN后,电镜下可见凋亡细胞,转染后48小时,流式细胞仪检测显示ASODN组
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