【摘 要】
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目的:通过观察益气活血方对子宫内膜异位症大鼠异位内膜细胞的黏附侵袭分子E-cad、TIMP-1、MMP-2、MMP-9的影响,探究益气活血方治疗内异症的可能机理,为中药临床治疗内异症提供依据。方法:采用连续有2个正常动情周期的雌性SD大鼠66只,体重200±15g/只。造模前予以大鼠每天肌注苯甲酸雌二醇,以0.1μl/g体质量给药,给药2天。造模时对大鼠进行麻醉,用自体移植法造模。假手术组术程同模
【基金项目】
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国家自然科学基金项目《基于miR-199a介导的NF-kB通路研究益气活血方抑制内异症子宫内膜干细胞黏附侵袭的作用机制》（项目编号:81704108）
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目的:通过观察益气活血方对子宫内膜异位症大鼠异位内膜细胞的黏附侵袭分子E-cad、TIMP-1、MMP-2、MMP-9的影响,探究益气活血方治疗内异症的可能机理,为中药临床治疗内异症提供依据。方法:采用连续有2个正常动情周期的雌性SD大鼠66只,体重200±15g/只。造模前予以大鼠每天肌注苯甲酸雌二醇,以0.1μl/g体质量给药,给药2天。造模时对大鼠进行麻醉,用自体移植法造模。假手术组术程同模型组,不缝合内膜于腹腔。造模3周后再次剖腹检查内膜移植是否成功,共有60只大鼠造模成功,随机分组为空白组、模型组、孕三烯酮组、中药低、中、高剂量组6组。各组给药:（1）空白组:生理盐水灌胃;（2）模型组:生理盐水灌胃;（3）中药低剂量组:6.25g/kg/d;（4）中药中剂量组:12.5g/kg/d;（5）中药高剂量组:25.0g/kg/d;（6）孕三烯酮组:0.26mg/kg/d。中药组每次1ml,每日早晚2次;西药组每周2次,其余时间予1ml生理盐水,每日早晚2次;模型组和空白组予以生理盐水1ml,每日早晚2次。给药方式均采用灌胃,共持续4周,末次给药后,根据阴道涂片观察结果,于动情前期处死大鼠采集实验样本。用免疫组化法检测大鼠内异症组织中Ki-67、PCNA的增殖指数,用RT-PCR法检测E-cad、TIMP-1、MMP2、MMP-9的基因表达情况,用Western blot法检测E-cad、TIMP-1、MMP2、MMP-9的蛋白表达情况。结果:（1）各组内异症模型大鼠的病灶大小比较:手术各组大鼠的病灶在用药前体积大小相近,差异没有统计学意义（P＞0.05）;和模型组相比,孕三烯酮组和中药高剂量组的内异症病灶减少（P＜0.05）;而中药低、中剂量组的变化差异没有统计学意义（P＞0.05）。（2）各组内异症模型大鼠的Ki-67表达及增殖指数比较:与空白组相比,模型组的Ki-67增殖指数升高,差异有统计学意义（P＜0.05）;与模型组相比,中药中剂量组、高剂量组、孕三烯酮组的Ki-67增殖指数降低,差异有统计学意义（P＜0.05）,低剂量组的增殖指数没有统计学差异（P＞0.05）;模型组、中药低、中、高剂量组的组间比较有统计学差异（P＜0.05）,且与中药剂量大小存在相关性。（3）各组内异症模型大鼠的PCNA表达及增殖指数比较:与空白组相比,模型组的PCNA增殖指数升高,差异有统计学意义（P＜0.05）;与模型组相比,中药中剂量组、高剂量组、孕三烯酮组的PCNA增殖指数降低,差异有统计学意义（P＜0.05）,低剂量组的增殖指数没有统计学差异（P＞0.05）;模型组、中药低、中、高剂量组的组间比较有统计学差异（P＜0.05）,且与中药剂量大小存在相关性。（4）各组内异症模型大鼠子宫内膜组织黏附侵袭相关基因表达的比较:与空白组相比,模型组E-cad、TIMP-1的表达降低,差异有统计学意义（P＜0.05）;与模型组相比,中药中剂量组、高剂量组、孕三烯酮组E-cad、TIMP-1的表达升高,差异有统计学意义（P＜0.05）,低剂量组的表达没有统计学差异（P＞0.05）;与空白组相比,模型组MMP-2、MMP-9的表达升高,差异有统计学意义（P＜0.05）;与模型组相比,中药中剂量组、高剂量组、孕三烯酮组MMP-2、MMP-9的表达降低,差异有统计学意义（P＜0.05）,低剂量组的表达没有统计学差异（P＞0.05）;模型组、中药低、中、高剂量组的组间比较有统计学差异（P＜0.05）,且与中药剂量大小存在相关性。结论:1.本实验证实益气活血方可以缩小内异症大鼠模型的内异病灶。2.益气活血方可以降低子宫内膜细胞增殖能力,抑制MMP-2、MMP-9的表达,提高E-cad、TIMP-1的表达,抑制大鼠内异组织的黏附侵袭能力。
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