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目的:
观察2型糖尿病及糖尿病肾病患者血小板活化标记物CD62p、PAC-1的表达,及其与尿微量白蛋白排泄率的关系,探讨血小板膜糖蛋白PAC-1及颗粒膜蛋白CD62p活化百分比在糖尿病肾病发病机制中的作用,为糖尿病肾病诊断、研究病情进展及抗血小板治疗、疗效观察提供指导。
方法:
将50例健康体检者作为对照组(NC),54例2型糖尿病无肾脏并发症患者作为糖尿病组(DM),50例2型糖尿病肾病患者为糖尿病肾病组(DN),三组年龄、体重指数相匹配。再根据尿微量白蛋白排泄率将糖尿病肾病组分为糖尿病肾病微量白蛋白尿组(DN1)和糖尿病肾病大量白蛋白尿组(DN2)两个亚组。入选病例均化验空腹(FPG)及早餐后2小时血糖(2hPG)、糖化血红蛋白(HbA1C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、尿微量白蛋白排泄率(UAER),并记录收缩压(SBP)、舒张压(DBP)。所有病例空腹早8:00用3.8%枸橼酸钠抗凝的真空采血管采集静脉血2ml,样本采集不扎止血带,弃去前2ml混有组织液的血液,直立样本管,避免混摇振荡,立即送实验室检测血小板CD62p、PAC-1。
试验管中加入全血样本5μl,再加入CD61 PerCP、CD62pPE、PAC-1 FITC各10μl。对照管中加入全血样本5μl,再加入CD61 PerCP、RGDS、Mouse gl PE各10μl,分别轻摇混匀,室温避光孵育10-15分钟后,均加入PBE磷酸盐缓冲液0.5ml稀释,即刻用流式细胞仪(FCM)上机检测。上机时先根据前向角和侧向角散射光信号设定血小板门,排除各种血小板聚集体,通过CD61PerCP标记确认血小板,每个样本测10000个血小板。
所有数据采用SPSS10.0软件进行单因素方差分析,LSD、Duncan多重比较及Spearman等级相关分析,结果用均数±标准差(mean±SD)表示。
结果:
1、2型糖尿病无肾脏并发症组与糖尿病肾病组临床资料比较无统计学差异。
2、DM组、DN1组、DN2组UAER分别为17.06±3.98μg/min、96.54±10.37μg/min、537.31±55.00μg/min明显高于NC组(10.03±3.02μg/min),有统计学意义(P<0.01),DN1组、DN2组UAER明显高于DM组(P<0.01),DN2组UAER明显高于DN1组(P<0.01)。
3、2型糖尿病肾病组血小板CD62p、PAC-1及两者同时表达的阳性率分别为16.31±1.27%、7.97±1.15%、28.40±3.23%,与2型糖尿病组(9.73±1.75%、2.83±0.62%、10.91±1.83%)比较显著升高(P<0.01),两组与正常健康对照组(3.22±0.65%、0.48±0.06%、4.96±1.03%)比较显著升高(P<0.01)。
4、DN1组血小板CD62p、PAC-1及两者同时表达的阳性率分别为14.55±1.41%、8.46±1.48%、29.15±4.17%,与DN2组(分别为18.43±2.33%、7.10±1.91%、27.07±5.29%)比较无差异。
5、相关分析显示UAER与CD62p正相关(r=0.28,P<0.05),与CD62p+PAC-1呈显著正相关(r=0.377,P<0.01),与PAC-1无关(r=0.051)。
6、血小板活化与临床资料的相关性分析显示,CD62p与DBP正相关(r=0.234,p<0.05),与LDL-C显著正相关(r=0.269,p<0.01);PAC-1与糖尿病病程正相关(r=0.296,p<0.05),与DBP正相关(r=0.247,p<0.05),与TC正相关(r=0.246,p<0.05);CD62p与PAC-1均表达与DBP显著正相关(r=0.340,p<0.01);与LDL-C显著正相关(r=0.335,p<0.01)。
结论:
1、2型糖尿病患者血小板活化标志物CD62p、PAC-1表达明显高于正常对照。
2、糖尿病肾病患者血小板膜糖蛋白PAC-1及CD62p表达阳性百分率均高于糖尿病无肾脏并发症患者。
3、糖尿病肾病大量尿白蛋白患者与微量白蛋白尿患者CD62p、PAC-1表达阳性率无差异。
4、糖尿病肾病尿微量白蛋白排泄率与CD62p、CD62p与PAC-1同时表达阳性率呈正相关,与PAC-1无关,检测CD62p或CD62p、PAC-1同时表达的血小板可作为糖尿病肾病临床诊断的辅助指标,并监测病情进展。
5、检测CD62p、PAC-1同时表达阳性率对糖尿病肾病发生、进展监测优于单独检测CD62p。
6、低密度脂蛋白胆固醇、舒张压的异常与血小板活化相关。
总之,血小板膜糖蛋白PAC-1和颗粒膜蛋白CD62p活化表达的阳性百分比,反映了2型糖尿病、糖尿病肾病患者血小板活化状态,与尿微量白蛋白排泄率呈正相关,可作为糖尿病肾病诊断、病情监测指标,为临床抗血小板治疗提供依据。