目的:探讨基于TMT技术筛选衰老相关蛋白影响的研究。方法:1.将30只SD大鼠,雌雄各半,按体重随机分为正常对照组、模型对照组、顶会穴组等3个组,每组10只大鼠。采用5%D-半乳糖颈部皮下注射造模方法造模,共造模42天,造模成功后开始施灸,隔一天灸一次,共灸21天。观察和检测体重变化、血清中过氧化氢酶(CAT)的活性、丙二醛(MDA)含量变化以及体力、学习记忆力等相关指标进行统计分析。再选取灸疗顶会穴组及模型组,每组10只SD大鼠,雌雄各半。2.将收集的俩组血清经去血清高丰度蛋白及SDS-PAGE电泳及其FASP酶解后预质朴分析,Date Base数据库比对,肽段TMT标记。其中灸疗顶会穴组标记为(126,127,128),模型组标记为(129,130,131)。3.使用高分辨质谱仪Q Exactive进行质谱分析,用Proteome Discoverer 2.1软件和MASCOT2.6蛋白质坚定软件对Uniprot蛋白质数据库以FDR<0.01的标准对数据进行搜索。选择差异具有显著的结果为表达差异倍数大于1.2倍(上下调)且P<0.05,并应用GO分类,KEGG通路等数据库平台对差异表达蛋白进行生物信息学分析。结果:1.⑴灸疗对模型大鼠体重的影响:正常组、顶会穴组与模型对照组比较均有显著性差异(P<0.05或P<0.01),⑵灸疗对模型大鼠行为学指标的影响:(1)灸疗对TRT的影响:正常组、顶会穴组与模型对照组比较均有显著性差异(P<0.01)(2)灸疗对EN的影响:正常组、顶会穴组与模型对照组比较均有显著性差异(P<0.01)?灸疗对体力的影响:正常组、顶会穴组与模型对照组比较均有显著性差异(P<0.01)⑶灸疗对模型大鼠血清指标的影响:正常组、顶会穴组与模型对照组比较均有显著性差异(P<0.01)。2.筛选到了14个差异表达蛋白,其中有纤维蛋白原样蛋白1、生长激素d6、Mhc-bi类蛋白的成熟α链、A-1抑制剂3、补体C1s等5个上调蛋白,谷胱甘肽S-转移酶、Ube2l3蛋白、肌酸激酶B型、泛素结合酶e2 v1、葡萄糖-6-磷酸1-脱氢酶,半胱氨酸和富含甘氨酸蛋白1、ADP-核糖基化因子3、肽基脯氨酸顺序易抅酶FKBPIA、14-3-3蛋白γ等9个下调蛋白。3.生物信息学分析:(1)从GO功能注释分析发现:差异表达蛋白主要参与的生物过程有代谢过程、细胞过程、生物调节、对刺激的反应等。有结合和催化活性等分子功能。在细胞组分里主要在细胞部分,细胞外区部分、细胞器和细胞器部分等。从GO功能富集分析发现(P<0.05,TOP10):从生物过程上内吞作用的阳性调节、黒质发育、I-Kappa b激酶/NF-kappa B信号的阳性调节,对食物反应等,分子功能上主要富集在泛素结合酶活性、泛素蛋白连接酶活性等,在细胞组分上富集在泛素连接酶复合物。(2)从KEGG通路注释及富集分析发现:共得到了51个信号通路,其中P<0.05的通路有谷胱甘肽代谢、内吞作用、催乳素信号通路、Toll和IDM信号通路、病毒致癌等5个通路。这5个通路里谷胱甘肽代谢、催乳素信号通路、病毒致癌等信号通路与抗衰老有关。结论:1.蒙医镇赫灸疗法通过影响模型大鼠相关酶及体力、学习记忆力等行为途径而达到抗衰老目的。2.筛选到了纤维蛋白原样蛋白1、生长激素d6、Mhc-ib类蛋白的成熟α链、AI-1-抑制剂3、补体C1s等14个抗衰老相关差异表达蛋白,通过对差异表达蛋白进行生物信息学分析了解生物过程,分子功能以及存在的细胞组分及其各差异蛋白之间的关系并证明了利用不同抗衰老有关的信号通路来抗衰老。3.本次研究进一步证明蒙医镇赫灸法抗衰老配穴原理,也达到了用蛋白和其通路解释蒙医灸疗法对抗衰老的临床作用机制的目的并提供了科学依据。