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目的：本课题利用已建立的可示踪的转基因斑马鱼系 TG（zLmo2:Loxp-DsRed-Loxp-EGFP)和TG(zC-myb:EGFP)，通过实时跟踪观察，从而动态观测原始造血干细胞和定向造血干细胞的迁移过程，以期了解斑马鱼原始造血和定向造血的关系，为进一步研究斑马鱼血液系统发育提供可能的理论依据。 方法：分别收集红色荧光蛋白（DsRed）标记原始造血干细胞的转基因系 TG（zLmo2:Loxp-DsRed-Loxp-EGFP)和绿色荧光蛋白（EGFP）标记定向造血干细胞的转基因斑马鱼系TG(zC-myb:EGFP)自交和侧交的斑马鱼胚胎，于12hpf(hours post-fertilization，hpf)去卵膜，进行局部麻醉，利用激光共聚焦显微镜对全胚胎进行连续实时的动态扫描,从12hpf开始观察，直至48hpf,期间每隔两小时拍摄一次进行追踪观察。 结果：（1）红色荧光蛋白（DsRed）标记原始造血干细胞的转基因系 TG（zLmo2:Loxp-DsRed-Loxp-EGFP)自交后，观察胚胎发现lmo2+的细胞在14hpf开始表达红色荧光，主要表达的部位是在斑马鱼胚胎的头部中胚层（anterior paraxial mesoderm,ALM），随后在中间细胞群（intermediate cell mass,ICM）表达；18-22hpf发现红色荧光标记的lmo2+的细胞在ICM区表达逐渐增强，24hpf达到高峰,30hpf在尾部造血组织（caudal hematopoietic tissue，CHT）开始表达，持续至48hpf。（2）绿色荧光蛋白（EGFP）标记定向造血干细胞的转基因斑马鱼系TG(zC-myb:EGFP)自交后，观察绿色荧光标记的c-myb+的细胞,24hpf开始表达，最初表达的部位是PBI（posterior bloodisland，PBI）区，随后在28hpf表达逐渐增强，并沿着AGM区向原肾导管迁移，28hpf在PBI区和AGM区的表达逐渐增强，持续到36hpf；此外发现在28hpf斑马鱼的头部和胸腺有少量c-myb+细胞的存在;32-36hpf PBI区、AGM区和头部的c-myb+细胞逐渐增多；42-48hpf在斑马鱼头部 c-myb+细胞逐渐减少（3） TG(zLmo2:Loxp-DsRed-Loxp-EGFP：TG(zC-myb:EGFP)侧交的斑马鱼胚胎，观察发现受精后24小时可以看到PBI区有少量的又红又绿的lmo2+和c-myb+的双阳性细胞和红色的lmo2+的细胞；26hpf PBI区lmo2+和c-myb+双阳性细胞逐渐增多，28hpf lmo2+和c-myb+双阳性细胞在PBI区逐渐增多并向主动脉-性腺-中肾（aorta-gonad-mesonephros，AGM）迁移，30-38hpf lmo2+和c-myb+双阳性细胞在尾部 PBI区逐渐增多达到高峰，其中在此过程中 lmo2+和c-myb+的双阳性细胞一部分沿着原肾导管迁移至原肾，另一部分沿着尾静脉（caudal vein，CV）向尾部造血组织（CHT）迁移。提示定向造血干细胞的一部分可能由PBI区原始造血干细胞分化而来。此外追踪观察的过程中发现在原肾导管处有 c-myb+的细胞,这群细胞与lmo2+和c-myb+双阳性细胞一起沿着原肾导管向原肾迁移，提示可能一部分定向造血干细胞来源于内皮祖细胞。此外在侧交后的胚胎中追踪观察到，在斑马鱼头部的延髓部位有少量lmo2+和c-myb+双阳性的细胞存在，随后逐渐增多，持续到34hpf，提示斑马鱼头部的延髓可能是定向造血早期一个新的造血位点。 结论：①追踪观察斑马鱼原始造血和定向造血的发生和细胞迁移过程，提示斑马鱼定向造血干细胞可能有少部分来源于原始造血干细胞。②在斑马鱼胚胎延髓部位观察到lmo2+和c-myb+双阳性细胞的存在，提示斑马鱼的延髓可能是定向造血一个新的造血位点。