转egt基因对家蚕生长发育的影响

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家蚕是完全变态昆虫,一生经历卵、幼虫、蛹和成虫四个发育时期。人们希望人为调节家蚕的蛹期,以实现鲜茧缫丝,提高丝质。本研究开展了转家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nucleopolyhedrovirus,BmNPV)蜕皮甾体尿苷二磷酸葡糖转移酶(ecdysteroid UDP-glueosyhransferase,EGT)基因对家蚕发育的影响。构建了以家蚕热休克蛋白23.7基因启动子(heat shock promoter 23.7,hsp23.7)控制红色荧光蛋白(Discosoma red fluorescent protein,DsRed)报告基因的瞬时表达载体,瞬时表达试验结果显示,hsp23.7启动子可以驱动DsRed基因在家蚕体内及BmN培养细胞中表达;构建了基于piggyBac转座子的新型转基因载体,该载体带有hsp23.7驱动的BmNPV egt表达盒和BmNPV早期基因启动子(ie-1)控制的新霉素抗性基因(neo)的表达盒。用精子介导法将转基因载体导入家蚕卵内,经过PCR、dot blotting和western blotting鉴定,成功的获得了转基因家蚕。发育调查结果显示,G2代转基因家蚕的孵化率比非转基因家蚕低约60%、发育延缓,幼虫期龄期经过比非转基因家蚕平均延长3 d;蛹期比非转基因家蚕蛹期延长4 d;蜕皮激素(MH)水平测定结果显示,转基因蚕血淋巴的蜕皮激素含量明显比非转基因家蚕低90%,表明将egt基因导入家蚕基因组可使蚕体的MH水平下降,延缓蚕的变态发育;推测用蛹期特异性启动子控制egt基因在蛹期特异表达可延缓蛹的发育。
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