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辣椒（Capsium annuum）是农业生产上的大宗蔬菜之一,“六五”、“七五”、“八五”期间,我国把辣（甜）椒抗病新品种的选育作为重点攻关项目。危害辣椒地上部分的害虫有烟青虫,属于鳞翅目,主要以幼虫蛀食花、蕾、果,造成大量落果或烂果,使辣椒产量下降。苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis Berliner）杀虫晶体蛋白基因（Bt基因）中的一种CryIA（C）能编码133kD的晶体蛋白质,杀虫范围即为鳞翅目。因此,本实验对用含有gusA基因和抗卡那霉素的nptII基因的双元载体质粒pKUC将CryIA（c）基因导入到辣椒外植体的农杆菌介导法进行改良,然后在含有卡那霉素的选择培养基上进行筛选培养,获得一批Bt转基因植株,再对其进行GUS瞬时表达的检测以确定CryIA（c）基因是否整合入辣椒细胞的基因组;对Bt蛋白的存在与否进行检测以确定CryIA（c）基因能否正常表达;再进行转基因外植体生根条件的探索,为选育出抗虫的转基因辣椒新品种打下良好基础,在生产上有着其积极的生态意义和经济意义。 1.农杆菌介导CryIAc基因转化辣椒方法的改进 在利用根癌农杆菌介导法进行辣椒遗传转化的过程中,对转化材料、转化过程使用的农杆菌菌液浓度及侵染时间、转化后的清洗步骤、AgNO3的加入、抗生素筛选浓度等5个方面进行研究分析,以获得Km抗性芽外植体频率为指标,结果显示:转化材料对转化效率影响较大,而转化用的农杆菌菌液浓度及侵染时间、清洗步骤,决定着外植体的腐褐化率及农杆菌的污染率。本实验对利用农杆菌介导法将杀虫蛋白基因CryIAc转入辣椒的方法加以改进和完善,为建立起一种转化效率高、稳定性好、通用性较强的辣椒农杆菌转化技术体系打下了良好的基础。 2.转基因植株的检测与鉴定 通过含一定浓度Km的选择培养基对辣椒外植体进行再生培养筛选,不具备