菜蛾盘绒茧蜂寄生对小菜蛾幼虫神经肽转录水平的影响

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本论文首先在分析实验室已有的小菜蛾幼虫脑转录组数据基础上,应用表达序列标签(expressed sequence tag, EST)序列验证的方法鉴定出分属于17个神经肽家族的19个小菜蛾神经肽基因,通过cDNA末端快速克隆(rapid-amplification of cDNA ends, RACE)方法获得了其中13个基因的全长;其次应用荧光定量PCR (qRT-PCR)的方法检测了这些神经肽基因在小菜蛾幼虫不同发育阶段的转录规律以及菜蛾盘绒茧蜂寄生/假寄生对这些神经肽基因转录的影响。现将结果总结如下:1)小菜蛾幼虫脑神经肽家族基因的鉴定对小菜蛾幼虫脑转录组数据进行Blastx分析,筛选出能匹配到昆虫神经肽基因的21个EST序列并逐一克隆验证,然后用RACE法获得包括Adipokinetic hormone I、 Adipokinetic hormone Ⅱ、Allatostatin A、Allatostatin C、CCHamide、Bursicon a、Bursicon β、Crustacean cardioactive peptide、on transport peptide、Neuroparsin、Neuropeptide F、 Prothoracicotropic hormone和Allatotropin在内的13个神经肽基因的cDNA全长,获得Short neuropeptide F、Diuretic hormone、FMRFamide、Tachykinin、Neuropeptide-like peptide和Leucokinin在内的6个基因的3’端序列。2)小菜蛾幼虫神经肽基因在小菜蛾幼虫不同发育阶段的转录规律通过qRT-PCR的方法对小菜蛾19个神经肽基因在小菜蛾幼虫不同发育阶段的转录模式进行了检测。结果表明,小菜蛾19个神经肽基因在不同发育历期的总体转录规律是:在每个龄期的末期存在一个转录高峰。3)菜蛾盘绒茧蜂寄生/假寄生对小菜蛾幼虫神经肽基因转录的影响通过qRT-PCR的方法对菜蛾盘绒茧蜂寄生/假寄生后的小菜蛾幼虫神经肽基因转录水平的影响进行分析。结果表明在寄生后小菜蛾幼虫神经肽基因的转录趋势可以分成上调型和下降型,而假寄生后的转录趋势可以分成平稳型和波动型。即在菜蛾盘绒茧蜂寄生后,Adipokinetic hormone I、Adipokinetic hormone I、Allatostatin A和Allatostatin C等15个小菜蛾神经肽基因在幼虫脑部的转录趋势属于下降型,而Neuropeptide-like peptide、Neuroparsin、Leucokinin和Ion transport peptide属于上调型;菜蛾盘绒茧蜂假寄生后,Adipokinetic hormone Ⅰ、Allatostatin A、CCHamide和Ion transport peptide等14个神经肽基因在幼虫脑部的转录趋势属于平稳型,而Leucokinin、Adipokinetic hormone Ⅱ、AllatostatinC和Bursicon a属于波动型。
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