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黏液是分布于气道表面、由上皮杯状细胞和黏膜下腺细胞分泌的一层弹性凝胶,主要是由水和黏蛋白组成,而黏蛋白又以黏蛋白5AC(MUC5AC)最重要。黏蛋白在维持气道湿化、上皮细胞信号转导等方面发挥重要作用,也是呼吸系统抵御外界刺激的非特异性屏障。但在某些条件下,如病原体感染以及吸烟等,可促进黏蛋白分泌。细菌感染是气道黏液高分泌的常见原因。研究表明,肺炎支原体感染后,可上调气道上皮细胞分泌MUC5AC,从而参与支气管哮喘以及慢性阻塞性肺疾病(COPD)的急性发作,但迄今为止其机制尚未明了。本研究旨在明确支原体巨噬细胞活化脂肽-2(MALP-2)上调气道上皮细胞黏蛋白MUCSAC表达的调控机制。本研究首先体外培养人气道上皮细胞NCI-H292,采用MALP-2刺激后,ELISA和实时定量PCR检测MUC5AC的分泌以及mRNA表达水平;同时采用ELISA检测基质金属蛋白酶-9(MMP-9)以及转化生长因子-α(TGF-α)的分泌情况;Western blot分析表皮生长因子受体(EGFR)的磷酸化。最后分别采用EGFR和MMP-9抑制剂,以及TGF-α中和抗体预处理细胞,观察其对MUC5AC分泌的影响。结果显示,用0.1、1.0和5.0μg/mL MALP-2作用24h后,可明显诱导其分泌MUC5AC,且其分泌水平随着MALP-2浓度的增高而逐渐增多,此外,MUC5AC的分泌也呈一定的时间依赖性,即5μg/mL MALP-2作用8h后,MUC5AC显著增多,24h后达到峰值,随后持续至48h。定量PCR也得到了类似结果。MALP-2也能诱导NCI-H292细胞分泌MMP-9和TGF-α,给予10nmol/L MMP-9抑制剂预处理细胞后,TGF-α和MUC5AC含量显著减少。5μg/mL浓度MALP-2刺激0~4h后,可诱导NCI-H292细胞EGFR磷酸化。采用5μg/ml EGFR中和抗体预处理细胞30min后,可显著下调MUC5AC的水平。EGFR抑制剂AG-1478处理也得到了类似结果。此外,NCI-H292细胞用5μg/ml TGF-α中和抗体预处理30min后,MUC5AC水平也明显降低。以上结果表明MALP-2通过MMP-9/TGF-α/EGFR诱导NCI-H292细胞分泌MUC5AC。