尼曼-匹克样蛋白家族的成员之一——尼曼-匹克C1型类似蛋白1(Niemann-Pick type C1Like1, NPC1L1)在胆固醇吸收代谢过程中起着极其重要的调节作用，与脂代谢紊乱密切相关。但NPC1L1在代谢性疾病尤其是脂代谢紊乱中具体的分子机制仍然没有阐释清楚，因此深入研究NPC1L1作用机制对于预防和治疗这类疾病具有极其重要意义。NPC1L1体内分布具有物种差异性。在小鼠中主要表达于小肠中，肝脏中极少表达。而在人类，NPC1L1在肝脏中表达最多。因此在小鼠模型中研究NPC1L1作用及机制可能并不适合，需寻找或建立更合适的模型。猪，尤其是小型猪，在解剖学、代谢和药物动力学方面与人类极其相似，尤其在疾病特征方面，其遗传特征和表现型与人类更为接近使得猪成为广泛应用的疾病模型动物。而随着转基因及体细胞核移植等技术的完善，转基因猪作为研究人类疾病的模型越来越受到重视。本研究旨在建立肝特异性表达hNPC1L1转基因巴马小型猪以期揭示NPC1L1在肝脏脂代谢中作用的分子机制。首先利用pLiv-11和pEGFP-C1质粒及人NPC1L1基因重构了真核表达载体pLiv-11-Neor/Kanr-hNPC1L1，利用重构载体上的apoE肝内调控区（HCR）使hNPC1L1定向表达于肝组织。载体经SpeI酶切线性化后转入小型猪胎儿成纤维细胞，G418筛选后得到肝特异性表达hNPC1L1的阳性细胞克隆，作为核供体最终制备了11头克隆猪，其中7头为转基因克隆猪，RT-PCR和Western blotting检测表明目的基因特异性地表达于肝组织，免疫组化分析表明目的基因定位于肝小叶间胆管膜上。肝组织MDA和SOD活性测定表明肝脏发生严重的脂质过氧化，另外荧光定量PCR检测表明，NPC1L1能调控脂质合成相关基因的转录，引发肝脏严重的脂质过氧化，导致脂代谢紊乱和肝脏疾病的发生。本研究成功制备了肝特异性表达hNPC1L1转基因巴马小型猪，证实NPC1L1定位于肝小叶间胆管膜上，具有促进肝脏脂质过氧化的作用，在肝脏脂质代谢和相关疾病中扮演着重要角色，本研究旨在进一步揭示NPC1L1在肝脏脂质代谢中的分子机制，阐明脂代谢相关疾病的发病机理，最终找到新的治疗靶标并开发出新的治疗药物。