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人类8型疱疹病毒(Human herpesvirus 8,HHV-8)可导致卡波西肉瘤等多种肿瘤。HHV-8的复制与转录激活蛋白(Replication and transcription activator,RTA)为病毒重激活所必需,并足以完成HHV-8从潜伏态到裂解态的转换。RTA能与靶基因启动子上的RRE序列直接结合,激活靶基因的转录表达,也能通过与细胞内蛋白的相互作用间接与靶序列结合,激活下游基因的表达。ORF45是γ型疱疹病毒特有的蛋白,它能与干扰素调节因子7(Interferon regulator factor 7,IRF7)相互作用,并抑制IRF7的磷酸化和入核,抑制了I型干扰素的表达,使得病毒逃避宿主的免疫应答。ORF45在病毒建立潜伏态以及进入裂解复制的过程中也发挥了重要作用。但目前尚无关于RTA是否能激活ORF415表达的报道。
本文表达和纯化了ORF45蛋白,并制备了ORF45多克隆抗体。蛋白免疫印迹显示ORF45多克隆抗体具有较高的滴度和良好的特异性。本文构建了全长及系列缺失的ORF45启动子控制下的报告质粒,并将这些报告质粒与RTA的真核表达质粒共转染293T细胞,发现1)RTA能激活ORF45启动子；2)ORF45启动子中应答RTA的区域位于-750 bp～-251 bp;3)RTA的酸性激活结构域是激活ORF45启动子所必需的。我们还将ORF45以及RTA的真核表达质粒共转染293T细胞,借助蛋白质免疫印迹实验技术,发现RTA能减少ORF45的蛋白产量。本文为探索RTA激活ORF45表达,以及为研究RTA对ORF45的影响积累了前期材料,有助于加深对HHV-8逃避免疫监视机制的了解。