罗勒多糖对人淋巴管内皮细胞(HLECs)VEGF-C/D-VEGFR-2/3信号通路及Bax和Bcl-2基因表达的影响

来源 :山东中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:a137167443
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目的:探讨罗勒多糖对单培养和共培养体系中HLECs体外成管能力及HLECs-VEGF-C/D-VEGFR-2/3信号通路影响,分析在罗勒多糖(分别在常氧和乏氧条件)干预下VEGF-C/D及VEGFR-2/3mRNA及蛋白的表达水平,初步揭示罗勒多糖对HLECs-VEGFC/D-VEGFR2/3信号通路的作用;同时检测凋亡调节基因Bax和Bcl-2的表达水平进一步探究罗勒多糖对HLECs活性的干预机制,为药物的进一步临床应用和开发提供依据。方法:采用体外成管,酶联免疫分析、免疫细胞化学及RT-PCR定量分析等方法观察在不同给药浓度和氧浓度下相关信号分子基因和蛋白表达的变化。结果:1.HLECs单培养及共培养体系的建立SKOV3、HLECs复苏接种后,生长状态良好,细胞贴壁后呈现梭形状态,当细胞镜下融合80%-90%可以顺利传代。非接触共培养体系建立后,可以在光镜下分别观察两种细胞生长情况,两种细胞没有发生相互接触混合,各实验组细胞生长状态良好,共培养体系建立成功。2.罗勒多糖对HLECs体外成管能力的影响单培养和共培养体系中HLECs体外成管形态良好,利用不同浓度罗勒多糖干预后,能够有效地降低HLECs的体外成管数目。3.罗勒多糖对HLECs中VEGF-C/D-VEGFR-2/3信号通路的影响3.1罗勒多糖对HLECs中VEGFR-2/3mRNA表达的影响在单培养体系中,常氧条件下罗勒多糖能够上调HLECs中VEGFR-2/3mRNA的表达;乏氧条件下罗勒多糖能够下调VEGFR-3mRNA的表达,而对VEGFR-2mRNA的表达无影响。在共培养体系中,罗勒多糖在常氧和乏氧条件下均可下调VEGFR-3mRNA的表达;在乏氧条件下可下调VEGFR-2mRNA的表达,而对常氧条件下的VEGFR-2mRNA的表达无影响。3.2罗勒多糖对HLECs中VEGFR-2、VEGFR-3蛋白表达的影响在单培养体系中,常氧条件下罗勒多糖能够增加VEGFR-2和VEGFR-3蛋白的表达,乏氧条件下能够降低VEGFR-3蛋白的表达,且不同给药浓度间存在差异;对VEGFR-2蛋白的表达无影响。在共培养体系中,罗勒多糖在常氧和乏氧条件下均可降低VEGFR-3蛋白的表达;在常氧条件下可降低VEGFR-2蛋白的表达,而对乏氧条件下VEGFR-2蛋白的表达无影响。3.3罗勒多糖对HLECs共培养体系上清液中VEGF-C/D蛋白表达的影响在常氧和乏氧条件下,共培养体系中VEGF-C和VEGF-D的含量显著升高;在常氧和乏氧条件下,罗勒多糖均可降低VEGF-C的含量,同时在乏氧条件下可降低VEGF-D的含量。4.罗勒多糖对HLECs中Bax和Bcl-2mRNA的影响在单培养体系中,罗勒多糖在常氧条件下能够下调BaxmRNA的表达,上调Bcl-2mRNA的表达;在乏氧条件下上调BaxmRNA的表达,而对Bcl-2mRNA的表达无显著影响。在共培养体系中,罗勒多糖能够在常氧条件下下调Bcl-2mRNA的表达,而对BaxmRNA无显著影响,在乏氧条件下能够上调BaxmRNA和Bcl-2mRNA的表达。通过观察不同条件下罗勒多糖对HLECs体外成管能力及相关信号分子表达的变化,发现罗勒多糖对HLECs中VEGFC/D-VEGFR2/3信号通路及Bax、Bcl-2mRNA的表达有干预作用,同时在不同氧浓度下的调节作用存在差异性。
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