锦鲤疱疹病毒(Koi Herpesvirus, KHV)是锦鲤疱疹病毒病(Koi Herpesvirus Disease, KHVD)的病原,它主要感染锦鲤和鲤鱼,鱼苗和成鱼死亡率均达到80%以上。1998年在以色列,美国和德国分别有报道分离到该病毒,目前,世界上已有多个国家暴发过锦鲤疱疹病毒病。我国的东北地区在近两年也有报道发生过锦鲤疱疹病毒病。该病能引起鱼的鳃坏死,肾炎和眼窝凹陷等症状。KHV所带来的高致死率和长期潜伏感染已引起国际兽疫局(OIE)的高度关注,同时我国在2008年,农业部第1125号公告中,将锦鲤疱疹病毒病列为二类动物疫病。本试验在国内外KHV PCR检测方法的基础上,建立了KHV Nested-PCR检测方法,优化了引物浓度,退火温度和循环次数等反应条件,该PCR检测方法的灵敏度为0.01pg。针对扩增到的目的片段,进行分离纯化测序,并与目前已经完整测序的3株KHV进行比对,相似程度达到98%以上,蛋白比对结果也表明该蛋白属于KHV病毒粒子的相关蛋白。试验中扩增的ORF26基因片段经过软件分析,有着良好的抗原性,有可能成为基因工程疫苗的目的片段。本研究还对我国江苏,浙江,安徽和山东等地部分城市的锦鲤,食用鲤鱼和鲫鱼进行锦鲤疱疹病毒的分子流行病学检测。在南京等8个城市或地区发现有锦鲤疱疹病毒基因组DNA的存在。另外,本试验首次在我国的鲫鱼中检测到锦鲤疱疹病毒的存在。试验中大部分样品鱼体征正常,无明显的眼观病变,但通过本试验的Nested-PCR检测方法可以检测到KHV基因组ORF26的存在,说明该病毒在我国淡水池塘中有潜伏存在,有着发病的可能性。结合该病毒的高死亡率和病发后的长期潜伏特性,非常有必要通过Nested-PCR方法加强对锦鲤疱疹病毒病的监控,将我国南方地区该病暴发的可能性降到最低,避免我国的养殖业遭受重大的经济损失。