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背景:全厚皮片移植是整形外科常用的创面修复的方法。因含有表皮及真皮全层,故其植皮效果良好,优于其他两种皮片。但是,随着皮片厚度的增加,其成活往往变得困难。脂肪间充质干细胞(Adipose Derived Stem Cells,ADSCs)是间充质干细胞(Mesenchymal Stem Cells,MSCs)的一种,具有多分化和旁分泌的能力,而在提取ADSCs的过程中,需先获取基质血管成分(Stromal Vascular Fraction,SVF),在某些方面,SVF的作用甚至被认为大于ADSCs。两者均能够促进创面血供的建立,且由于血供的建立在皮片愈合的过程中起到相当重要的作用,因此SVF和ADSCs理论上具有提高全厚皮片存活的能力。目的:1.明确通过酶消化的方法,能够获得具有多分化及旁分泌功能的ADSCs;2.验证异体ADSCs与自体SVF对全厚皮片移植的影响;3.对异体ADSCs的使用方法进行改进,并验证其对全厚皮片移植的效果。方法:1.取大鼠腹股沟脂肪垫,以I型胶原蛋白酶消化并经离心获取SVF悬液,接种于培养皿并于培养箱中培养;将不同浓度ADSCs接种于24孔板,收集无血清培养基后ELISA检测其旁分泌能力;以诱导分化培养基对细胞进行诱导,检测其成脂、成骨、成软骨的多分化能力;2.取SD大鼠24只,分为三组,分别在全厚皮片及创面基底之间使用自体SVF(组A)、异体ADSCs悬液(组B)和PBS缓冲液(组C),于术后3d、7d和14d分别观察并计算皮片坏死率,并行HE、Masson染色及CD31和VEGF免疫荧光染色进行检验;3.对异体ADSCs的使用方法进行改进,分别为术前7d预先皮内及皮下注射ADSCs及PBS缓冲液(记为组a和组b)和添加3%透明质酸钠(Hyaluronic acid sodium,HA),ADSCs+HA记为组c,PBS+HA记为组d,并经动物实验验证其效果。结果:1.通过胶原酶消化并离心,能够成功获取SVF悬液,并经过培养能够获得较均质性的ADSCs,能够经诱导分化成脂肪细胞、软骨细胞和骨细胞,同时验证其具有较强的旁分泌功能,且以10~6这一数量级为最多;2.组A的3个观察时间点的皮片坏死率分别为25.29±4.54%、28.18±4.76%和32.17±6.16%,优于组B的46.42±3.95%、51.86±5.53%和59.68±5.70%与组C的51.91±5.04%、62.63±5.33%和71.51±12.70%,且具有明显的统计学意义。单独比较组B与组C,7d的皮片坏死率具有统计学意义,但3d和14d并无明显差异;3.术后3d,组a和组b皮片坏死率分别为37.87±3.01%和49.86±2.86%,具有统计学意义,与第二部分异体ADSCs皮下注射相比,亦优于其结果,但与自体SVF相比,其皮片坏死率仍较高;术后7d,组a和组b皮片坏死率分别为44.12±2.82%和57.45±3.74%,具有统计学意义,与异体ADSCs皮下注射相比,并无明显统计学差异,但与自体SVF相比,其皮片坏死率仍较高;术后14d,组a和组b皮片坏死率分别为45.51±3.33%和60.58±2.39,具有统计学意义,与异体ADSCs皮下注射相比,稍有优势,但并无统计学差异,而与自体SVF相比,其皮片坏死率仍较差,但与其并无统计学差异。结论:1.通过酶消化及离心,从大鼠腹股沟脂肪中能够提取SVF并培养得到ADSCs细胞,并经成脂、成骨和成软骨分化诱导证实具有多向分化能力。并且,ADSCs具有较强的旁分泌能力,能够分泌多种生长因子,并且,10~6数量级效果最佳;2.相较于PBS缓冲液,自体SVF及异体ADSCs皮下使用均能提高全厚皮片移植的效果,但是自体SVF的效果更佳;3.在全厚皮片移植前注射异体ADSCs能够在一定程度上改善皮片的存活情况,但这种情况较即刻使用异体ADSCs优势并不明显,且仍旧不如自体SVF的效果。而在ADSCs细胞悬液中添加HA则并不能提高ADSCs对全厚皮片移植的效果。