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本实验以棉花抗病品种BD-18和感病品种泗棉三号的悬浮细胞为材料,研究了棉花细胞在黄萎病菌毒素处理后H2O2和NO的变化,并用半定量RT-PCR的方法检测毒素、H2O2和NO对棉花谷胱苷肽-S-转移酶基因转录水平的影响。
本实验首先确定了用冷冻浓缩后透析的方法初步提纯棉花黄萎病菌毒素,该方法能有效去除粗提毒素中的蔗糖和盐离子并能最大程度的保留黄萎病菌分泌的蛋白成分;对毒素蛋白成分鉴定结果表明蛋白条带多,每种蛋白的含量少,小分子量蛋白含量多,糖蛋白染色结果显示,毒素蛋白中分子量在35.8kDa-83.2kDa之间的蛋白大多数为糖蛋白,分子量小于35.8kDa的蛋白多为非糖蛋白;性质鉴定结果显示,毒素中有活性的蛋白成分具有部分可耐高温高压,且毒素蛋白中的蛋白成分和糖基成分都具有致萎活性。
用毒素处理抗病和感病的棉花悬浮细胞,可检测到H2O2和NO含量的瞬时升高,并且抗病品种显著高于感病品种。用SNP(NO供体)、H2O2、cPTIO、CAT处理棉花的悬浮细胞,结果发现,NO具有氧化与抗氧化双重作用,行使何种功能与浓度有关,在合适的浓度范围内具有抗氧化的作用。用cPTIO、CAT与毒素共同处理悬浮细胞结果说明在毒素处理过程中NO和H2O2两个信号分子互相影响。
半定量RT-PCR结果显示,毒素可增强GST基因的表达,抗病品种能对毒素处理做出快速反应;H2O2和NO均参与GST基因的表达,但可能是通过两条不同的途径。