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目的:拟通过小鼠腹腔单核巨噬细胞吞噬鸡红细胞功能、血清溶血素和溶血空斑形成、淋巴细胞转化功能、外周血CD4+、CD8+细胞水平及小鼠淋巴细胞CD28表达水平来观察扶正排毒3号对氢化可的松(Hydrocortisone,HY)所致免疫功能低下小鼠免疫功能状态的影响,来探讨扶正排毒3号提高免疫抑制小鼠免疫功能的机理,为治疗无症状HIV感染期中药制剂的研制奠定基础。 方法:实验于2009-02/10在河南省弘新药品科技研究所完成。实验分为5批,每批选用小鼠60只,随机数字表法分为6组,每组10只,其中5组皮下注射氢化可的松制备免疫抑制小鼠模型。于造模第1天,高、中、低剂量扶正排毒片组分别灌服10,5,2.5g/kg扶正排毒3号(西洋参、淫羊藿、山药、白术、茯苓、巴戟天、连翘、白花蛇舌草、甘草等药组成,河南中医学院第三附属医院),香菇多糖片组灌服0.6g/kg,模型组灌服同体积的生理盐水。另有一组为空白对照组,每鼠仅灌服同体积的生理盐水。每天给药1次,连续给药8天,给药容积均为0.2ml/10g体重。给药第4~7天,除空白对照组外,各组颈部皮下注射氢化可的松50mg/kg(5mg/ml,0.1ml/10g体重),用于造模。①实验1:第1批小鼠于第8天早上每鼠均腹腔注射5%鸡红细胞液0.5mL,于给鸡红细胞2h后给药,给药后2h,即给鸡红细胞后4h处死小鼠,脱颈椎处死小鼠。观察小鼠腹腔巨噬细胞吞噬情况。②实验2:第2批小鼠于给药第1天每鼠腹腔注射5%鸡红细胞液0.2mL,于最后一次给药后2h,小鼠眼眶取血,分离血清。取上清液于UV-2000型分光光度计540nm处比色。观察溶血素形成情况。③实验3:第3批小鼠于给药第1,2,3天每鼠加肌注0.8g/L植物血凝素(8mg/kg),于最后一次给药后2h,小鼠剪尾取血,推片,瑞氏染色,油镜观察,计算外周血淋巴细胞转化百分率。④第4批小鼠于第7天给药后6小时,摘眼球取血,EDTA抗凝,流氏细胞仪检测小鼠外周血CD4+、CD8+细胞水平及小鼠淋巴细胞CD28表达水平。 结果:①与模型组比,高、中、低剂量扶正排毒3号组和香菇多糖片组均可显著提高免疫抑制小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬百分率(P<0.05),高、中、低剂量扶正排毒3号组和香菇多糖片组可明显提高腹腔巨噬细胞吞噬指数(P<0.05)②与模型组比,高、中、低剂量扶正排毒3号组和香菇多糖片组可显著促进小鼠溶血素的生成(P<0.05)。③与模型组比,高、中、低剂量扶正排毒3号组和香菇多糖片组均可使外周血淋巴细胞转化率显著升高(P<0.05)。④扶正排毒3号中、低剂量组及香菇菌多糖组能提高免疫抑制小鼠的CD4+细胞百分数值,而扶正排毒3号低剂量组作用更明显;扶正排毒3号中、低剂量组能提高免疫抑制小鼠外周血CD8+细胞百分数值;扶正排毒3号中剂量组、香菇菌多糖组能提高免疫抑制小鼠外周血CD4+/CD8+比值。⑤扶正排毒3号各剂量中、低剂量组及香菇菌多糖组均能提高免疫抑制小鼠的CD28百分数值,而扶正排毒3号低剂量组作用更明显。 结论: ①艾毒致元气损伤是艾滋病重要病机,精气亏虚、元气不足是艾滋病发病的内因;②把“无症状带毒期”作为中医药治疗艾滋病的切入点的观点,利用中医药的优势早期干预,能够提高患者生存质量,稳定和增强免疫功能;③氢化可的松致免疫低下的小鼠模型为一种传统可行、操作性强、重复性好的模型,适用于“扶正排毒3号”免疫调节机制研究;④扶正排毒3号可提高腹腔巨噬细胞吞噬指数,促进小鼠溶血素和空斑形成细胞的生成,使外周血淋巴细胞转化率升高,能提高免疫抑制小鼠的CD4+、CD8+T细胞百分数值及CD4+/CD8+比值,能提高免疫抑制小鼠的CD28表达百分数值。