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研究背景和目的:近年来多种实验数据表明,肝癌细胞可能来源于肝脏干细胞的异常激活和恶性转化,它与肝癌的发生发展密切相关。研究肝脏干细胞的生长调控对了解肝癌的发生发展机制有重要意义。本实验主要研究肝脏干细胞疫苗预防和治疗小鼠皮下肝癌移植瘤的免疫应答机制。研究方法:将10-14周龄的C57BL/6J小鼠随机分成3组(5只/组),肝脏干细胞疫苗预防组、Hepa1-6疫苗预防组、PBS对照组,每组小鼠每周接种1次,共3次,接种结束后第1周建皮下肝癌移植瘤。另将周龄相同的,建模成功的肿瘤负荷相当的C57BL/6J小鼠分3组(5只/组),肝脏干细胞疫苗治疗组、Hepa1-6疫苗治疗组、PBS对照组,疫苗接种方式同预防组。用ELISA法检测小鼠外周血中Ig G类抗体滴度;通过补体依赖的细胞毒实验(CDC)检测产生抗体是否具有抗肿瘤功能;采用乳酸脱氢酶释放法(LDH法)检测小鼠脾T淋巴细胞对靶细胞的杀伤毒性;流式细胞术检测小鼠脾淋巴细胞中Tregs/CD4+T细胞比例。结果:1、在预防组中:肝脏干细胞疫苗组小鼠肝癌的生长速度及肿瘤体积及小于Hepa1-6疫苗接种组(P<0.05),肝脏干细胞疫苗组小鼠肿瘤平均重量(0.12±0.06g)较Hepa1-6疫苗组(0.23±0.05g)轻,比较差异具有统计学意义(P<0.05)。ELISA法检测肝脏干细胞疫苗组小鼠外周血Ig G抗体浓度(67.19±9.13ng/ml)高于Hepa1-6疫苗组(49.67±10.95ng/ml)。通过CDC实验检测抗体的抗瘤作用,肝脏干细胞疫苗组肝癌细胞的死亡率(43.86±8.33%)高于Hepa1-6疫苗组(32.91±3.23%),比较差异有统计学意义(P<0.05)。LDH法检测CTL杀伤毒性,肝脏干细胞疫苗组小鼠脾脏淋巴细胞对肝癌细胞的杀伤率高于Hepa1-6疫苗组,差异有统计学意义(P<0.05)。肝脏干细胞疫苗组小鼠脾淋巴细胞中Tregs/CD4+T细胞的比例(5.52±0.05%)较Hepa1-6疫苗组(8.76±0.41%)低,差异均有统计学意义(P<0.05)。2、在治疗组中:肝脏干细胞疫苗组小鼠皮下肝癌的生长速度和肿瘤体积小于Hepa1-6疫苗组,肝脏干细胞疫苗组肿瘤平均重量(0.13±0.07g)较Hepa1-6疫苗组(0.24±0.05g)轻,比较差异有统计学意义(P<0.05)。肝脏干细胞疫苗组小鼠外周血Ig G抗体浓度(62.39±10.09ng/ml)高于Hepa1-6疫苗组(47.92±12.10ng/ml),比较差异有统计学意义(P<0.05);CDC实验检测肝脏干细胞疫苗组肝癌细胞的死亡率(41.91±9.45%)高于Hepa1-6疫苗组(33.17±4.88%),比较差异均有统计学意义(P<0.05)。肝脏干细胞疫苗组CTL对Hepa1-6细胞的杀伤率高于Hepa1-6疫苗组,差异有统计学意义(P<0.05)。肝脏干细胞疫苗组小鼠脾淋巴细胞中Tregs/CD4+T细胞的比例(6.65±1.13%)比Hepa1-6疫苗组(8.84±0.45%)低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:1.肝脏干细胞疫苗具有抑制小鼠肝癌移植瘤生长的作用;2.肝脏干细胞疫苗在预防和治疗小鼠肝癌中均能诱导荷瘤小鼠产生特异性抗瘤抗体和肿瘤抗原特异性效应T细胞,产生抗瘤效应;3.肝脏干细胞疫苗能下调小鼠脾脏Tregs/CD4+T比例,从而减弱Tregs对宿主免疫功能的抑制作用