目的:为了探讨蝎毒导致疼痛的分子机制,构建出BmmK NaTx13的大肠杆菌重组表达系统,用以制备出具有高活性的BmK NaTx13多肽,为后续的BmK NaTx13的研究提供物质保障。方法:本研究通过多种行为学动物模型、电生理技术联合计算机模拟技术,通过高效液相HPLC分离、氨基酸测序鉴定和膜片钳技术以及大肠杆菌重组表达系统等进行一系列研究。结果:本文探讨了蝎毒导致疼痛的相关分子机制。在课题组前期对东亚钳蝎毒素的研究中,我们通过HPLC分离、氨基酸测序鉴定和膜片钳技术筛选发现了一条66个氨基酸的长链钠通道毒素,其对Nav1.7有显著的延迟失活活性。其N端序列与NCBI基因库中预测的BmK NaTx13基因编码的多肽N端序列完全一致。我们进一步设计同源引物,利用课题组前期以东亚钳蝎尾腺总RNA为模板构建的蝎毒腺cDNA文库调取的毒素基因与BmK NaTx13完全一致,并且我们还构建了 BmK NaTx13的大肠杆菌重组表达系统,制备出了高活性的BmK NaTx13。结论:本研究发现蝎毒主要是通过延迟Nav通道特别是Nav1.7的失活,从而引起DRG神经元的动作电位发放频率增加,最终导致痛觉过敏和疼痛行为。并且我们成功构建了 BmK NaTx13的大肠杆菌重组表达系统,制备出高活性的BmK NaTx13多肽。