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[目的]探讨中药筋脉通(JMT)对高糖培养海马神经元凋亡及凋亡蛋白Bcl-2, Bax, Caspase-3表达的影响。[方法]新生24h SD大鼠取其海马,采用消化法分离海马神经元,密度梯度离心法和差速贴壁法进行纯化,NSE蛋白免疫荧光进行鉴定。神经元培养至第3天,培养基中分别加入25、50、75、100、125、150mmol/L葡萄糖(Glu),利用MTT比色法探索高糖对海马神经元的最佳作用浓度和作用时间。以中药血清药理学方法制备JMT含药血清。神经元培养至第3天,培养基中加入50mmol/L Glu,并分别加入10μmol/L Caspase凋亡抑制剂Z-VAD-FMK(ZVAD)和10%JMT高(JMTH)、中(JMTM)、低(JMTL)剂量含药血清。培养72h后,MTT比色法观察海马神经元活性的变化,流式细胞仪检测神经元的凋亡情况,Western Blotting检测神经元Bcl-2, Bax, Caspasep-3蛋白表达。[结果]1.成功培养海马神经元,经鉴定纯度达95%以上。2.MTT比色实验：各浓度高糖组随培养时间的延长,OD值上升,72h开始OD值明显下降,其中50、75、100mmol/LGlu组与48h OD值差异均具有统计学意义(P<0.05)；72h时,与正常对照组比较,各浓度高糖组OD值均明显降低(P<0.01),表明不同浓度的高糖对海马神经元的活性均有抑制作用。用50mmol/LGlu培养72h时,JMTH、JMTM和ZVAD组的OD值较50mmol/L Glu组显著升高(P<0.05),但JMTH和ZVAD两组间比较无显著性差异(P>0.05)。3.流式细胞仪检测：高糖组、ZVAD组和JMTH、JMTM、JMTL组的神经元凋亡率分别是：35.97%、28.85%、29.01%、31.22%、32.68%,较正常对照组(19.45%)均明显增加(P<0.01)；ZVAD组和JMTH、JMTM、JMTL组神经元凋亡率较高糖组均明显下降(P<0.01),其中JMTH组凋亡率与ZVAD组无显著性差异(P>0.05)。4. Western Blotting检测：与正常对照组相比,高糖组、ZVAD组和JMTH、JMTM、 JMTL组Caspase-3、Bax表达均明显增加(P<0.05),高糖组和ZVAD组Bcl-2的表达明显下降(P<0.05)；与高糖组相比,ZVAD组和JMTH、JMTM、JMTL组的Caspase-3、Bax表达均明显下降(P<0.01),Bcl-2的表达明显升高(P<0.05)；与ZVAD组相比,JMTH、JMTM、JMTL组的Caspase-3、Bax表达明显下降(P<0.05), JMTH和JMTM组Bcl-2的表达明显增加(P<0.05)。[结论]1.采用消化法原代培养SD新生鼠海马神经元,经梯度离心法+差速贴壁法进行纯化,NSE蛋白免疫荧光鉴定纯度可达95%以上,成功培养海马神经元。2.高糖对海马神经元活性具有明显的抑制作用。JMT高、中剂量含药血清明显提高高糖条件下海马神经元的活性,其中JMT高剂量组的作用与ZVAD组无显著性差异。3.高糖条件下,海马神经元的凋亡增加。JMT能够抑制高糖条件下海马神经元的凋亡,其中JMT高剂量组的作用与ZVAD组无显著性差异。4.高糖条件下,海马神经元Bcl-2表达下降,Bax、Caspase-3表达升高,JMT含药血清能够改善高糖条件下Bcl-2、Bax和Caspase-3表达的异常,其中JMTH和JMTM组的效果优于ZVAD组。[创新点]探索中药复方筋脉通对高糖条件下海马神经元凋亡以及凋亡蛋白Bcl-2、Bax、 Caspase-3表达的影响。经检索国内外文献,高糖对体外培养海马神经元凋亡影响的报道已不少见,但未见高糖对体外培养海马神经元凋亡蛋白影响的报道,未见中药复方对体外高糖条件下海马神经元凋亡及凋亡蛋白影响的报道。