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深入研究奶牛泌乳功能的调控对解决我国奶牛业存在的产奶量低、乳品质低等制约我国奶牛业发展的问题具有重要的理论价值和实际意义。传统中草药王不留行作为重要的催乳中药之一,在临床和畜牧业生产中得到广泛的应用。其可能具有雌激素样活性,可激活泌乳信号途径,进而通过调控乳蛋白、乳糖和乳脂等的合成而促进泌乳。但王不留行促进泌乳性能的作用机理尚不清楚,尤其是王不留行在奶牛乳腺组织中调控泌乳的分子机理尚未见报道。本研究应用CASY细胞分析仪检测了不同作用时间下王不留行提取液对奶牛乳腺上皮细胞增殖和细胞活力的影响；从蛋白质组学方面考虑王不留行提取液对奶牛乳腺上皮细胞核基质蛋白质的影响,建立奶牛乳腺上皮细胞核基质蛋白双向电泳方法,并且应用双向电泳(2-DE)结合质谱技术(MALDI-TOF-MS)鉴定王不留行提取液对奶牛乳腺上皮细胞核基质蛋白的差异影响；应用荧光定量PCR验证差异蛋白在不同泌乳水平奶牛乳腺组织中的表达情况,从而深入探索其催乳机理。试验结果表明：①中草药王不留行提取液对原代培养的奶牛乳腺上皮细胞的增殖和细胞活力提高均显著(P<0.05),确定了王不留行提取液的体外最佳作用时间为24h,明显促进奶牛乳腺上皮细胞活力的增加,并增强细胞的增殖能力；②建立和优化了乳腺上皮细胞核基质蛋白双向电泳方法,获得蛋白斑点数多,重复性好的双向电泳图谱,为后续乳腺上皮细胞核蛋白质组研究提供了方法性基础。③通过添加中草药王不留行提取液作用于奶牛乳腺上皮细胞,应用双向电泳结合质谱技术分析,成功筛选并鉴定了具有重要意义的5种差异细胞核基质蛋白,分别为：ethylmalonic encephalopathy1(ETHE1), vesicle amine transport protein1homolog(VAT1), parkinson disease protein7homolog(Protein DJ-1), proteasome subunit alpha type-2(PSMA2)和SUMO-activating enzyme subunit1(SAE1),并且通过荧光定量RT-PCR的方法鉴定了其5个基因在转录水平上的表达差异情况。④通过荧光定量PCR的方法验证其5个基因在不同泌乳水平奶牛乳腺组织中表达的差异性,表明这5个基因都可能与奶牛乳腺乳蛋白及乳脂合成具有潜在的关联。以上试验研究结果表明,王不留行可显著提高乳腺上皮细胞的增殖和泌乳能力。首次从蛋白质组学方面阐明了王不留行体外作用于奶牛乳腺上皮细胞的作用机理。揭示了王不留行促进乳腺泌乳和增殖的蛋白质组学基础,但是这5个差异蛋白的具体作用机制还需进一步研究。