论文部分内容阅读
研究目的血管性痴呆（Vascular dementia,VD）是老年期痴呆的主要类型之一。而近年来,血管性认知障碍（Vascular cognitive impairment,VCI）越来越受到人们的关注,VD是其中的类型之一。临床观察发现VD患者存在血清甲状腺激素（Thyroid hormone,TH）水平异常,而临床并无甲状腺功能低下表现,多数研究认为此现象属于非甲状腺疾病综合征（Nonthyroidal illness syndrome,NTIS）。但我们的前期工作表明,慢性脑缺血大鼠存在中枢甲状腺功能异常及认知障碍,而补充外源性TH的慢性脑缺血大鼠的水迷宫成绩无明显障碍,提示慢性脑缺血大鼠的学习记忆障碍与中枢甲状腺功能受损有关。本课题拟在前期工作基础上,利用双侧颈总动脉永久性结扎制成慢性脑缺血致VCI大鼠和腹腔注射四氯化碳制成慢性肝纤维化致NTIS大鼠,比较外周和脑组织中甲状腺功能及认知能力;比较脑组织中TH中枢转运蛋白—有机阴离子转运多肽1C1（Organic aniontransporting polypeptide1C1,OPTA1C1）mRNA和单羧酸转运蛋白8（Monocarboxylate transporter 8,MCT8）mRNA水平;探讨慢性脑缺血认知障碍大鼠脑内TH水平和其代谢过程的相关因素变化;研究其脑组织TH代谢异常变化是NTIS的伴随症状还是有其独立的发生机制,从而为临床VCl的防治提供新的思路。研究方法1.实验分组:26只SPF成年SD大鼠,性别不限,随机分为三组:正常对照组（9只）;慢性脑缺血致VCI组（7只）（永久性结扎双侧颈总动脉5周）;脑外疾病（慢性肝纤维化）致NTIS组（10只）（四氯化碳,玉米油1:6稀释,腹腔注射,3次/周,共8周）。2.各组大鼠于实验终点进行Morris水迷宫测试,进行定位航行试验、空间探索试验。3.NTIS大鼠试验终点对取肝脏,用10%中性缓冲甲醛溶液保存,制作蜡块,行HE染色。4.各组大鼠均于实验终点应用放射免疫法测定血清T3、T4、FT3、FT4、rT3、TSH、TRH浓度和脑组织中T3、T4、rT3浓度。5.各组大鼠均于实验终点采用荧光定量PCR法测定脑组织中TH转运蛋白OATP1C1mRNA和MCT8mRNA的表达水平。6.统计方法:运用SPSS11.5统计软件进行统计处理,实验数据以均值±标准差（x±s）表示。定向航行实验逃避潜伏期的测量结果使用重复测量数据的多因素方差分析。多个独立样本的比较用单因素方差（one-way ANOVA）分析,多重比较采用LSD法进行分析。以P＜0.05为差异显著性检验界限。研究结果一.NTIS组大鼠肝脏病理学:HE染色,200倍光镜下NTIS组大鼠肝脏肝小叶结构尚存在,肝细胞肿胀排列成索状,部分胞浆内有胆汁淤积,汇管区慢性炎细胞浸润伴纤维组织增生,部分纤维组织伸入肝小叶内,将肝小叶分割呈结节状,局灶假小叶形成。二.水迷宫结果:通过Morris水迷宫测试大鼠的学习记忆能力,结果发现VCI组大鼠学习记忆能力显著降低:1.定向航行测定:三组间逃避潜伏期差异有统计学意义（F=4.783,P=0.024）。进一步多重分析,VCI组较NTIS组和正常组逃避潜伏期显著延长（P＜0.026,P＜0.013）。NTIS组与正常组逃避潜伏期差异无统计学意义（P＞0.585）。定向航行实验不同天数之间差异有统计学意义（F=9.518,P=0.000）。2.空间探索实验:VCI组较NTIS组及正常组时间缩短,差异有统计学意义（P＜0.016,P＜0.047）,NTIS组与正常组之间差异无统计学意义（P＞0.756）。三.血清TH测定结果:1.T4、FT3、FT4浓度NTIS组较正常组显著降低（P＜0.008,P＜0.000,P＜0.000）,T3浓度NTIS组较正常组降低（P＜0.04）;2.T3、T4、FT3浓度VCI组较正常组降低（P＜0.001,P＜0.006,P＜0.009）,FT4浓度VCI组较正常组降低（P＜0.016）;3.TSH、rT3浓度VCI及NTIS组与正常组之间差异无统计学意义（P＞0.618,P＞0.434）;4.TRH浓度VCI组和NTIS组均较正常组增高（P＜0.014,P＜0.023）。四.脑组织TH测定结果:1.T3、T4、rT3浓度VCI组较正常组降低（P＜0.042,P＜0.049,P＜0.049）;2.T3、T4、rT3浓度VCI组较NTIS组降低（P＜0.008,P＜0.012,P＜0.008）;3.T3、T4、rT3浓度NTIS组与正常组比之间差异无统计学意义（P＞0.453,P＞0.526,P＞0.420）。五.脑组织甲状腺激素转运蛋白转录水平测定结果:1.OATP1C1mRNA测定结果:OATP1C1mRNA水平NTIS组较VCI组和正常组显著增高（P＜0.030,P＜0.008）,VCI组与正常组之间差异无统计学意义（P＞0.710）。2.MCT8mRNA测定结果:MCT8mRNA水平NTIS组及VCI组均较正常组增高（P＜0.014,P＜0.047）,NTIS组和VCI组之间差异无统计学意义（P＞0.738）。研究结论1.慢性脑缺血认知障碍大鼠和慢性肝纤维化大鼠均有NTIS现象。2.下丘脑-垂体-甲状腺轴功能紊乱是NTIS的发病机制之一。3.慢性脑缺血大鼠脑组织TH浓度（T3、T4、rT3）明显降低,其认知能力障碍,可能与脑内甲状腺功能低下有关。4.慢性肝纤维化大鼠脑组织TH浓度（T3、T4、rT3）无明显变化,认知能力正常。5.中枢TH转运蛋白OATP1C1、MCT8代偿性增高是维持NTIS大鼠中枢TH水平相对稳定的关键因素。6.中枢TH转运蛋白尤其是OATP1C1的功能障碍是导致慢性脑缺血大鼠中枢TH水平低下的重要因素。7.慢性脑缺血认知障碍大鼠与肝纤维化大鼠虽都有NTIS表现,但中枢TH水平和中枢TH转运蛋白OATP1C1、MCT8水平有显著差别。慢性脑缺血大鼠出现中枢甲状腺功能低下,可能引起“脑甲减”。