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膀胱癌(Bladder cancer,BC)是泌尿生殖系统中最常见的恶性肿瘤之一,严重威胁患者的生命和健康。随着人民生活水平的提高,人口平均寿命的逐年递增,生活方式、饮食习惯及医疗水平的改变,加之环境污染的日益加重等,我国膀胱癌的发病率检出率逐年增加而且呈年轻化的趋势。早期诊断和治疗膀胱癌,将有助于提高患者的生存率。目前多数的研究集中在对蛋白因子或信号通路的调节上,而对基因的转录后翻译及表观遗传研究的较少。关于非编码RNA尤其是circRNA,在膀胱癌中的作用相关报道甚少。环状RNA(circRNA)是一类共价闭合形成的环状RNA,通常在RNA分子中的3’和5’末端连接在一起。因为circRNA不具有5’或3’末端,所以它们对核酸外切酶介导的降解具有抗性,并且据推测比细胞中的大多数线性RNA更稳定。大量研究表明,环状RNA在癌症的发生发展过程发挥重要的调节作用。研究发现,许多环状RNA与其亲本基因的表达存在正或负调控关系。circHIPK3在多种癌组织中表达异常,然而其在膀胱癌中的表达、作用及与亲本基因HIPK3的关系尚不清楚。HIPK3是丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,通过磷酸化JUN和RUNX2对细胞凋亡起负调节作用,其也可以通过增强雄激素受体(AR)介导的转录激活作用。JUN又名转录因子AP-1,其可以介导XIAP上调细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)表达。本研究通过检测膀胱癌和癌旁组织的环状RNA circHIPK3和HIPK3的mRNA表达入手,确定circHIPK3在组织间的表达差异及与膀胱癌临床病理特征的关系。并检测HIPK3与细胞增殖基因Cyclin D1的关系。为circHIPK3在膀胱癌中的作用提供理论基础。目的:探讨环状RNA circHIPK3与其亲本基因HIPK3的表达关系及其在膀胱癌中的作用。方法:1通过收集膀胱癌根治术患者的癌及癌旁组织,组织匀浆并提取总RNA和总蛋白。2通过q RT-PCR分别检测circHIPK3和HIPK3在膀胱癌及癌旁组织中的表达并进行表达率统计分析。3统计分析circHIPK3和HIPK3的表达与膀胱癌临床病理特征的关系。4利用Western blot检测HIPK3与Cyclin D1蛋白表达。5利用Graphpad prism5进行Pearson’s correlation分析,分别分析circHIPK3与其亲本基因HIPK3及HIPK3与Cyclin D1的线性相关性。结果:1 circHIPK3和HIPK3 mRNA在膀胱癌及癌旁组织中的表达与对照组相比,circHIPK3在膀胱癌组织中的表达显著下降(P<0.01),而HIPK3的mRNA水平在膀胱癌组织中的表达显著上升(P<0.05)。circHIPK3和HIPK3在膀胱癌组织中的表达差异率(癌组织中表达高于癌旁组织)分别为25.53%和76.60%(P<0.05)。2 circHIPK3与其亲本基因HIPK3 mRNA的表达存在线性相关关系。circHIPK3与其亲本基因HIPK3 mRNA在膀胱组织中的表达负相关关系(R=-0.6984,P=0.0004)。3 circHIPK3和HIPK3的表达与膀胱癌临床病理特征的关系发现circHIPK3和HIPK3的表达在不同年龄和性别个体之间没有显著差异(P>0.05),但circHIPK3与癌症的形态分级呈负相关(P<0.05),在TNM临床分期中,T2及以上患者circHIPK3表达显著下调,而HIPK3的mRNA表达显著高于T2以下等级(P<0.05),呈正相关。同样,淋巴转移患者样本中其circHIPK3表达显著下调,HIPK3的mRNA表达显示高于非转移个体(P<0.05)。4 HIPK3和Cyclin D1的蛋白表达水平在膀胱癌组织中显著上调。与癌旁组织相比,HIPK3和Cyclin D1的蛋白水平在膀胱癌组织中的表达显著上调,而其内参基因β-actin在癌组织和癌旁组织中表达均没有明显的变化。我们将Western blot的结果进行灰度值扫描,并进行统计学分析,如图3 B和C所示,HIPK3和Cyclin D1的蛋白水平在膀胱癌组织中的表达增加明显(P<0.05)。5在膀胱癌组织中HIPK3与Cyclin D1的表达存在线性相关关系。HIPK3与Cyclin D1蛋白表达水平在膀胱组织中存在线性相关关系,两者呈正相关(R=0.4377,P=0.0472)。结论:circHIPK3在膀胱癌组织中的表达显著下降(P<0.01),而HIPK3的mRNA表达水平在膀胱癌组织中的显著上升(P<0.05)。它们的表达率分别为25.53%和76.60%。circHIPK3和HIPK3的表达在膀胱癌组织中存在线性负相关关系。circHIPK3和HIPK3的表达在不同年龄和性别个体之间没有显著差异,但circHIPK3与癌症的形态分级,TNM临床分期及淋巴转移情况呈负相关,而HIPK3 mRNA表达与这些临床特征呈正相关。HIPK3和Cyclin D1的蛋白水平在癌组织中表达上调,两者在膀胱组织中呈线性正相关关系。