论文部分内容阅读
目的:胶质瘤起源于神经胶质细胞,是成人颅内最常见的恶性肿瘤,其恶性程度最高的是多形性胶质瘤母细胞瘤(GBM)。因胶质母细胞瘤恶性程度极高,常浸润周围脑组织与正常组织分界不清,以致手术难以完全切除。目前采用手术、标准放疗及化疗等综合治疗手段,平均生存期只有14个月,难以治愈。胶质瘤患者个体化基因表型的改变可能成为今后治疗的突破口。WNK激酶是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,因功能领域缺乏保守的赖氨酸而得此名称,目前已经发现4名成员,分别是WNK1、WNK2、WNK3和WNK4。其中WNK1、WNK2和WNK3已经广泛参与到肿瘤的增殖、凋亡、侵袭以及肿瘤微环境的过程。认为WNK2可能是具有神经系统肿瘤特异性的抑癌基因,WNK1和WNK3参与到肿瘤的侵袭,凋亡。此外,GBM肿瘤内广泛的低氧坏死区和血管形成,是其突出组织学的特征。研究显示,低氧可能导致肿瘤表型发生改变,包括转移增多、肿瘤复发、抗化疗、抗放疗、侵袭增加、患者生存率下降、基因组不稳定、凋亡潜能下降、基因表达改变、癌基因激活,诱导血管生成等作用。然而,胶质瘤适应低氧微环境的分子机制知之甚少,并且WNK激酶在低氧下对胶质瘤的调控研究尚不明确。研究方法:在实验中,我们使用Western blot检测在低氧环境下U87细胞中WNK3的表达情况。我们使用免疫组化分析评估了WNK3在人类胶质瘤标本中的表达。我们也使用质粒敲除U87细胞中WNK3的表达,并使用Western blot进行验证。随后使用敲除的WNK3的U87细胞系进行一系列的细胞生物学功能检测。增殖和细胞周期检测使用CCK-8实验和流式细胞仪,随后使用Western blot检测细胞周期相关蛋白CyclinD1。Transwell实验检测细胞侵袭,并使用Western blot检测调控胶质瘤侵袭相关的蛋白MMP-2和MMP-9。我们还使用Western blot检测了EMT相关蛋白Snail1、Vimentin和E-cadherin。结果:我们研究结果显示,在低氧下WNK3的表达在U87细胞系中显著增高。在胶质瘤标本中,WNK3在高级别(III和IV)胶质瘤中的表达显著高于低级别(I和II)胶质瘤。我们发现敲除WNK3的U87细胞系侵袭力下降,尤其在低氧下更为显著。检测侵袭相关的蛋白和EMT相关的蛋白得出的结果与实验结果一致。我们还发现敲除WNK3的U87细胞系会减少细胞增殖和诱导细胞周期阻滞。检测细胞周期相关蛋白得出结果与实验结果一致。结论:综上所述,WNK3在胶质瘤低氧微环境中扮演重要角色,可能是胶质瘤治疗中潜在的靶点。