两系杂交水稻在我国水稻生产中占有举足轻重的地位,为保障我国粮食安全发挥了重大作用。培育两系杂交水稻最关键的是选育性状优良的不育系。tms5是我国应用最广泛的温敏不育基因。本研究利用CRISPR/Cas9技术对TMS5进行定点编辑,获得了一系列TMS5基因功能缺失的突变体。主要研究结果如下:（1）成功构建pCAMBIA1301-Cas9-TMS5-gRNA表达载体,并将其通过农杆菌介导法转化粳稻品种F197,获得57株组培苗,其中有36株为阳性转基因植株。（2）对T₀代阳性转基因植株TMS5的突变情况分析,结果表明,在36株阳性转基因植株中,有23株检测到TMS5发生突变,突变率为63.89%。TMS5的突变类型包括杂合突变和纯合突变,其中杂合突变有15株,纯合突变有8株,纯合突变率占到了34.78%。纯合突变主要是在PAM前第3和第4碱基之间有单碱基A、T和G的插入,分别占了62.5%、25%和12.5%,而单碱基C的插入没有检测到。（3）对T₁代纯合缺失突变体的不育起点温度和农艺性状进行调查分析,结果表明,28℃可能是tms5突变体花粉育性的转换温度;与野生型相比,tms5突变体的结实率和单株重量显著降低,但是tms5突变体的株高、千粒重和有效穗数与野生型相比没有明显变化。