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[目的]研究人支气管上皮细胞(HBE)中苯并(a)芘氧化活化与DNA损伤的关系,进一步证实LOX是P450氧化代谢的替代途径,也为LOXsiRNA可能通过抑制LOX发挥防治化学物毒性作用的新线索提供有力证据。[方法]基因沉默实验：通过AgeI和EcoRI酶切质粒并用T4Ligase和shRNA Oligo片段连接,构建pAJ-U6-shRNA-CMV-GFP重组体,通过慢病毒载体系统,进行共转染293T细胞最后得到病毒浓缩液来感染目的细胞,之后通过PCR和Western-blot的方法检测基因沉默的效果。细胞实验：以不同浓度的苯并(a)芘对HBE细胞和经5-LOXsiRNA处理后的细胞组染毒,通过MTT实验检测苯并(a)芘对两组细胞存活率的影响；用Western-blot印记法检测各组5-LOX蛋白表达的情况；同时用单细胞凝胶电泳实验及流式细胞计数检测各组的DNA损伤情况。最后检测苯并(a)芘染毒后经过5-LOXsiRNA和化学抑制剂处理组对细胞的毒性和DNA损伤,并比较化学抑制剂和5-LOXsiRNA的细胞组抑制效果的差异。[结果]通过PCR鉴定转化子和阳性克隆后的测序以及病毒感染HBE细胞后通过PCR和Western-blot的方法检测,说明沉默5-LOX基因位点是较为成功。苯并(a)芘可以使HBE细胞内5-LOX蛋白表达增加,AA-861对5-LOX蛋白表达基本没有影响；苯并(a)芘可以对HBE产生明显细胞毒作用和DNA损伤,经5-LOXsiRNA,5-LOX抑制剂AA-861处理后的细胞组可以抑制苯并(a)芘毒性和DNA损伤,且5-LOXsiRNA细胞组抑制效果最为显著。[结论]5-LOX在HBE细胞内的蛋白表达可以经苯并(a)芘调节,特异性5-LOX抑制剂AA-861和5-LOXsiRNA都可抑制苯并(a)芘对细胞的毒性和DNA损伤,推测B(a)P可能是主要通过5-LOX介导的氧化活化生成亲电子物质,与DNA结合导致其损伤；这种DNA损伤可能与B(a)P的致癌作用有关,而利用RNA干扰技术抑制5-LOX可有效的阻止这一现象的发生发展。