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溃疡性结肠炎（ulcerative colitis,UC）是一种慢性肠道炎症性疾病,其在我国发病率呈逐年上升趋势。该病治疗周期长、易反复发作且难治愈,严重影响患者的生活质量。目前治疗上常用的药物主要为氨基水杨酸类制剂、糖皮质激素、免疫抑制剂、生物制剂等,但疗效有限且长期用药易产生不良反应。因此寻找安全、有效的药物对疾病的治疗十分关键。UC病因复杂,多种致病因素共同作用诱发疾病,联合用药可具有更好的疗效。课题组前期研究已证实大黄、马勃均对小鼠UC有治疗作用。大黄（rhubarb,DH）具有收敛、清热解毒的功效,可减轻炎症反应。马勃（Lasiosphaera seu Calvatia,MB）具有强大的止血功效,可促进伤口愈合。临床上马勃大黄配伍治疗上消化道出血效果显著,目前尚未见两者联用治疗UC的报道。本研究将马勃、大黄配伍制成栓剂观察其对UC模型小鼠的作用,探究两药是否具有协同作用。本实验将80只雄性昆明小鼠随机分为8组:正常组、模型组、柳氮磺胺吡啶（sulfasalazine,SASP）2.5 mg组、MB 5 mg组、DH 2.5 mg组、MB-DH三个联用剂量组（5 mg-2.5 mg、2.5 mg-1.25 mg、1.25 mg-0.625 mg）,每组10只。除正常组,对其他小鼠进行造模。利用噁唑酮（oxazolone,OXZ）与2,4,6-三硝基苯磺酸（2,4,6-trinitrobenzenesulfonic acid,TNBS）联合诱导UC小鼠模型:小鼠连续2 d腹部涂抹OXZ溶液致敏,于d 6开始使用OXZ或TNBS溶液进行灌肠,连续灌肠15 d,建立UC小鼠模型。造模20 d结束后正常组及模型组小鼠给予空白栓剂,其他给药组小鼠给予相应栓剂治疗,直肠给药,每天1次,连续给药14 d。给药期间观察小鼠整体状态、体重变化、粪便性状及潜血情况,记录各组小鼠给药d 1、d 7、d 14的疾病活动指数（disease activity index,DAI）。给药14 d结束后,小鼠心脏取血后分离结肠、脾脏、肾脏。计算脏器湿重指数;肉眼观察进行结肠黏膜损伤指数（colon mucosa damage index,CMDI）评分;采用HE染色法观察结肠组织病理变化并进行组织病理学评分（histopathological score,HPS）;ELISA法检测血清IL-1β、IL-6水平;比色法检测结肠组织中髓过氧化物酶（myeloperoxidase,MPO）的活力;免疫组织化学染色对结肠蛋白TNF-α、TLR4、MyD88、NF-κB的表达进行定位及半定量检查;Western blot法检测结肠内蛋白TLR4、MyD88、NF-κB表达水平。通过小鼠整体状态、脏器指数、结肠损伤程度及炎症程度等多个指标综合评价马勃、大黄联用对小鼠UC的作用;通过炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α及蛋白TLR4、MyD88、NF-κB水平探讨马勃、大黄联用对TLR4/MyD88/NF-κB通路的影响。给药14 d结束后,与正常组相比,模型组小鼠整体状态变差,出现稀便甚至血便,结肠及脾脏发生水肿,DAI及结肠、脾脏湿重指数明显升高（P＜0.01）;与模型组相比,各给药组小鼠DAI及结肠、脾脏湿重指数均降低（P＜0.05或P＜0.01）;与MB 5 mg组和DH 2.5 mg组相比,MB 5 mg-DH 2.5 mg组小鼠给药d 14的DAI及结肠、脾脏湿重指数均降低（P＜0.05或P＜0.01）且与阳性对照组相比差异无统计学意义（P（29）0.05）。结果表明马勃、大黄均可减轻UC小鼠症状、降低结肠及脾脏湿重指数,且两药联用对DAI及结肠、脾脏湿重指数的降低效果更明显。结肠损伤评分结果显示,与正常组相比,模型组小鼠结肠红肿缩短,远端结肠黏膜受损、固有层隐窝减少且出现炎症细胞浸润,CMDI、HPS均明显升高（P＜0.01）;与模型组相比,各给药组小鼠CMDI、HPS均明显降低（P＜0.01）;与MB 5 mg组和DH 2.5 mg组相比,MB 5 mgDH 2.5 mg组和MB 2.5 mg-DH 1.25 mg组小鼠CMDI、HPS均降低（P＜0.05或P＜0.01）;MB 5 mg-DH 2.5 mg组的CMDI、HPS与阳性对照组相比差异无统计学意义（P（29）0.05）。表明马勃、大黄可减轻UC小鼠结肠损伤,且两药联用改善结肠损伤的效果更明显。ELISA实验及结肠MPO活力检测结果显示,与正常组相比,模型组小鼠血清中炎症因子IL-1β、IL-6水平及结肠MPO活力升高（P＜0.01）;与模型组相比,各给药组小鼠血清两炎症因子水平及结肠MPO活力均降低（P＜0.01）;与MB 5 mg组和DH 2.5 mg组相比,MB 5 mg-DH 2.5mg组小鼠血清两炎症因子及结肠MPO活力均明显降低（P＜0.01）。该结果表明马勃、大黄可降低UC模型小鼠血清IL-1β、IL-6水平及结肠MPO活力,并且两药联用对炎症因子水平及MPO活力的降低效果更明显。免疫组织化学染色和Western blot实验结果显示,与正常组相比,模型组小鼠结肠蛋白TNF-α、TLR4、MyD88、NF-κB表达水平均明显升高（P＜0.01）;与模型组相比,各给药组小鼠上述四个蛋白表达呈降低趋势;与MB 5 mg组和DH 2.5 mg组相比,两种检测方法结果均显示MB 5 mg-DH 2.5 mg组小鼠结肠TLR4、MyD88、NF-κB表达水平降低（P＜0.05）。该结果表明马勃大黄联用可明显下调UC模型小鼠结肠中蛋白TNF-α、TLR4、MyD88、NF-κB表达水平,抑制TLR4/MyD88/NF-κB通路。综上所述,马勃、大黄均对OXZ与TNBS联合诱导的小鼠UC有治疗作用。两药联用MB 5 mg-DH 2.5 mg组效果更佳,MB 2.5 mg-DH1.25 mg组及MB 1.25 mg-DH 0.625 mg组较两药单用效果好或相似且给药量小。两药联用的抗炎机制可能与抑制TLR4/MyD88/NF-κB通路,降低炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6水平有关。