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研究目的:(1)探究TPD52基因在胶质瘤组织、正常脑组织及U87细胞中的表达水平;(2)探究干扰TPD52基因表达后对胶质瘤U87细胞增殖、周期及凋亡的影响;(3)探究干扰TPD52基因表达后对胶质瘤U87侵袭、迁移的影响;(4)探究mi RNA-34a在胶质瘤组织及U87细胞中的表达水平;(5)探究mi RNA-34a对胶质瘤细胞细胞周期的调节作用;(6)探究mi RNA-34a通过靶向TPD52调节胶质瘤U87细胞的周期变化。研究方法:(1)收集我院12例胶质瘤患者病例标本,12例脑外伤患者正常脑组织病理标本,应用荧光定量PCR检测TPD52 m RNA的表达量,应用Western blot检测TPD52蛋白的表达量。应用荧光定量PCR检测mi RNA-34a的表达量。(2)将携带着sh RNA-tpd52(抑制tpd52的核苷酸序列)、sh RNA-NC(阴性对照的核苷酸序列)的慢病毒体外转染胶质瘤细胞系U87。在转染48 h后荧光显微镜下观察表达GFP细胞数量,采用荧光定量PCR、Western blot分别检测TPD52 m RNA及蛋白表达量,MTT检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期分布,Annexin V和PI双染流式细胞术检测细胞凋亡,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力。(3)将mi RNA34a模拟物及mi RNA-34a抑制物转染入U87细胞,并用荧光定量PCR检测转然后细胞mi RNA-34a的表达水平。查阅相关文献并使用生物信息网分析预测TPD52的3,UTR是mi RNA-34a的作用靶点,采用荧光素酶报告实验检验TPD52是否为mi RNA-34a的靶基因。U87细胞经不同因素处理后,采用荧光定量PCR检测TPD52及相关蛋白的m RNA表达水平;采用Western blot实验检测TPD52及相关蛋白的蛋白表达水平;利用流式细胞仪检测U87细胞的细胞周期。研究结果:(1)荧光定量PCR检测结果显示tpd52m RNA在Ⅲ-Ⅳ级胶质瘤组织(ΔCT0.73±0.47)、U87细胞(ΔCT0.74±0.32)中的表达水平明显高于正常脑组织(ΔCT1.92±0.42)(P<0.05);而U87细胞与Ⅲ-Ⅳ级胶质瘤组织中tpd52m RNA表达水平差异无统计学意义。Western blot检测结果显示TPD52蛋白表达量在在Ⅲ-Ⅳ级胶质瘤组织、U87细胞中的表达水平明显高于正常脑组织的表达水平。(2)U87细胞慢病毒转染率通过携带的GFP表达来评估,通过在荧光显微镜下细胞计数得出细胞转染率>90%。与sh RNA-NC组及空白对照组相比较,sh RNA-tpd52组细胞TPD52 m RNA及蛋白表达量明显减少(P<0.01),而且细胞增殖能力明显下降,差异有统计学意义(P<0.05);细胞周期被阻滞在G0/G1期、细胞凋亡比例明显增加(P<0.05),细胞迁移能力明显下降差异有统计学意义(P<0.05);细胞侵袭能力明显下降差异有统计学意义(P<0.05)。(3)荧光定量PCR检测结果显示mi RNA-34a在Ⅲ-Ⅳ级胶质瘤组织(ΔCT3.26±0.24)、U87细胞(ΔCT3.45±0.12)中的表达水平明显低于正常脑组织(ΔCT1.94±0.40)(P<0.05);而U87细胞与Ⅲ-Ⅳ级胶质瘤组织中mi RNA-34a表达水平差异无统计学意义。(4)经转染后的U87细胞,经周期实验发现转染mi RNA-34a模拟物可明显使U87细胞停留在S期的细胞数量比例明显减少为16.12%,P<0.05,而转染mi RNA-34a抑制物可明显使U87细胞停留在S期的细胞数量比例明显增加为43.56%,P<0.05。双荧光素酶报告基因实验发现转染mi RNA-34a模拟物可明显使U87细胞中TPD52的3,UTR活性明显降低为32%,P<0.05,而转染mi RNA-34a抑制物可明显使U87细胞中TPD52的3,UTR活性明显升高为58%,P<0.05。结论:(1)TPD52在胶质瘤组织中表达水平比正常脑组织中较高。(2)干扰TPD52基因表达,可抑制胶质瘤细胞的增殖,促进细胞凋亡、阻滞细胞周期。(3)干扰TPD52基因表达,可抑制胶质瘤细胞迁移能力及侵袭能力。(4)mi RNA-34a在胶质瘤组织中表达水平比正常脑组织中较低。(5)mi RNA-34a可以调节胶质瘤细胞的细胞周期,抑制胶质瘤细胞S期细胞比例。(6)mi RNA-34a具有直接靶向TPD52调节胶质瘤细胞的周期变化。