目的:胆固醇-半乳糖苷是本实验室利用非水相酶促合成法研制的新型配体,可以与磷脂制成配体脂质体纳米粒,研究发现,其脂质体的肝细胞摄取率相较于普通脂质体增加了 2-5倍。目前实验室已成功制成了胆固醇-半乳糖苷介导的药物脂质体。但是目前对胆固醇-半乳糖苷的合成还处于小试试验阶段,很多参数都不完善,因此本文对胆固醇-半乳糖苷的酶促合成工艺技术进行了放大,通过放大试验完善了其合成纯化的工艺路线。并将放大后的胆固醇-半乳糖苷用于制备紫杉醇配体脂质体;之后对胆固醇-半乳糖苷介导的紫杉醇配体脂质体制剂进行了稳定性试验、制剂配伍试验以及急性毒性研究。方法:1.在对胆固醇-半乳糖苷进行中试放大的过程中,使用逐步放大的方法,先将其放大至小试时的5倍,在5倍条件下以产率及纯度作为评判指标,对胆固醇-半乳糖苷合成及纯化过程中的处方工艺流程进行优化,使最终产物的产率>90%,纯度>95%,然后使用优化后的处方工艺将反应放大至小试时的50倍,方法同上。2.以紫杉醇标准品作为外标,在HPLC条件下,建立紫杉醇配体脂质体含量测定的方法学。3.以紫杉醇脂质体的冻干粉作为研究对象,分别进行高温(40℃)、高湿(25℃,RH70%±5%)、强光(4500±5001x)稳定性试验,试验时长设置为10天,于第0、5、10天取样,测包封率、Zeta电位、粒径、pH值、氧化指数等指标;并考察其加速(30±2℃,RH65%±5%)稳定性,试验时长设置为6个月,于第0、1、2、3、6个月取样,测定粒径、电位、包封率、pH值、氧化指数等指标。4.以紫杉醇脂质体的冻干粉作为研究对象,使用0.9%氯化钠注射液、5%葡萄糖注射液、10%氯化钠注射液、50%葡萄糖注射液四种输液分别与其配伍,试验时长设置为24h,于0、4、8、12、24h取样测定粒径、电位、包封率、pH值、氧化指数等指标。5.使用单次给药注射,以紫杉醇配体脂质体冻干粉作为研究对象,普通紫杉醇脂质体冻干粉作为对照,使用0.9%氯化钠注射液溶解药物,试验动物选用SPF级小鼠,首先通过预实验确定两种脂质体的最大安全剂量和最小致死剂量,然后根据公示(r为两剂量组时间的比值,n为预分组数,a最小致死剂量,b为最大安全剂量)确定最终实验分组以及每组注射剂量,注射后放置14天,观察小鼠死亡情况并记录,计算两种脂质体的LD50,并进行比较。结果:1.在将胆固醇-半乳糖苷放大至50倍后,通过对乳糖醇和胆固醇-单乙烯酯的摩尔比、酶的种类及用量、混合溶剂的比例等因素单因素考察以及正交试验,最终得到的产物产率约为96%,纯度约为95%。2.在对HPLC法测定紫杉醇配体脂质体内药物含量进行方法学考察时,结果显示,脂质体内的其他物质不影响紫杉醇的含量测定,精密度、回收率等显示结果良好。3.稳定性试验结果表明,脂质体在高温、高湿、强光照射条件下包封率、粒径、电位等指标均未产生显著变化;加速稳定性试验中脂质体在3个月之内,包封率、粒径、电位等指标均未产生显著变化,至6个月时包封率等出现较大下降。4.配伍稳定性显示,脂质体冻干粉在于0.9%氯化钠注射液、5%葡萄糖注射液、10%氯化钠注射液、50%葡萄糖注射液四种输液分别配伍后,在24h内包封率、粒径、电位等指标均未产生显著变化。5.急性毒性预试验中,得到了两种脂质体对小鼠的近似100%死亡的最小致死量和0%死亡的最大耐受量,普通脂质体的为30mg/ml和20mg/ml,紫杉醇配体脂质体的为80mg/ml和40mg/ml,正式试验阶段,通过观察和记录小鼠的死亡情况,最终计算得两种脂质体的LD50,普通紫杉醇脂质体LD5为23.454mg/ml,其95%可信度区间范围在22.109-24.788mg/ml;紫杉醇配体脂质体的LD50为63.455 mg/ml,其 95%可信度区间范围在 57.544-71.872mg/ml。结论:1.胆固醇-半乳糖苷在放大到50倍后产率高,纯度好,稳定性优良,可以用于批量试制。2.用于测定紫杉醇配体脂质体的药物含量的HPLC法,准确性高,专属性强,灵敏度好,可以在接下来的试验中用于检测紫杉醇配体脂质体中紫杉醇药物的含量。3.稳定性试验表明,在各种极端条件下,短时间内脂质体都可以保持良好的稳定性,但是正常情况下不宜贮存超过3个月,而且作为注射剂时,可以很好地与多种输液配伍,是临床上理想的新型制剂。4.配伍稳定性表明,紫杉醇配体脂质体作为注射剂时,可以很好地与多种输液配伍,是临床上理想的新型制剂。5.急性毒性试验表明,相比于普通脂质体,胆固醇-半乳糖苷介导的紫杉醇配体脂质体具有更好的安全性和更大的安全剂量范围,这种特性可能与其肝靶向相性有关。