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目的:通过观察不同浓度甲泼尼龙对慢性淋巴细胞白血病(CLL)细胞增殖和凋亡的影响,分析其与CLL患者临床特征的关系,以探讨大剂量糖皮质激素在CLL治疗中的作用机制,更好的为CLL治疗提供依据。方法:无菌分离34例CLL患者外周血中CLL细胞进行体外培养,分别给予不同浓度的甲泼尼龙进行处理,选择24 h、48 h时间点CCK8(Cell Counting Kit 8)法检测细胞增殖和流式细胞术检测细胞凋亡。设立0.5 μM甲泼尼龙处理的干预组和不含药物的对照组,经培养48 h后收集细胞。用流式细胞术检测膜联蛋白V(Annexin V)-FITC/碘化丙啶(PI)以明确细胞凋亡程度。分析凋亡率与CLL患者临床特征的关系。结果:1.34例CLL患者中,男性22例,女性12例,中位年龄63岁(33～76岁),Binet 分期 A期 6例(17.65%),B 期 12例(35.29%),C 期 16 例(47.06%)。初诊患者25例(73.53%),复发/难治患者9例(26.47%)。复杂核型13例(43.33%,n=30)。12例(35.29%)患者伴p53基因缺失或突变(其中10例(29.41%)患者伴p53基因缺失,9例(26.47%)患者伴p53基因突变,7例(20.59%)患者既伴有缺失又伴有突变)。15例(45.45%,n=33)患者免疫球蛋白重链可变区(IGHV)基因无突变,5例(16.67%,n=30)患者伴MYD88 L265P突变。2.甲泼尼龙抑制CLL细胞的增殖具有剂量和时间依赖性:体外培养CLL细胞,分别予不同浓度的甲泼尼龙(0、0.01μM、0.1 μM、0.5 μM、1 μM、50μM、100 和500 μM)处理,CCK8法检测CLL细胞的增殖,24 h和48 h对CLL 细胞的抑制作用分别为(8.14%、20.28%、26.48%、32.33%、34.13%、33.73%、45.74%)和(10.73%、28.80%、35.23%、36.94%、39.36%、38.90%、41.27%)。甲泼尼龙浓度为0.01μM和0.1 时,CLL细胞增殖活力无明显下降,当甲泼尼龙浓度大于0.5 μM时,CLL细胞增殖活力出现明显下降,该抑制作用在48 h更明显。3.甲泼尼龙促进CLL细胞的凋亡具有剂量和时间依赖性:体外培养CLL细胞,分别予不同浓度的甲泼尼龙(0、0.05 μM、0.1μ M、0.5μM、1 μM、10 μM、50 μM和100 μM)处理,流式细胞术检测CLL细胞的凋亡,24 h和48 h CLL细胞的凋亡率分别为(22.01%、26.85%、22.60%、41.94%、44.37%、55.50%、57.50%、59.60%)和(21.86%、28.60%、45.65%、43.31%、49.91%、59.55%、69.15%、71.60%)。4.甲泼尼龙浓度在0.5 μM时达到一个平台期,继续加大浓度,抑制CLL细胞增殖的作用并不显著。5.甲泼尼龙对CLL细胞凋亡的影响具有明显的个体差异性。34例CLL患者48 h 0.5 μM甲泼尼龙的抑制率中位数为27.67%(6.70%～73.00%)。6.伴p53基因异常(突变或缺失)的CLL患者凋亡率(35.70%±18.08%)与无p53基因异常的凋亡率(27.12%±17.52%)无统计学差异(P=0.144)。其中伴p53基因缺失的CLL患者凋亡率(32.52%±18.01%)与无p53基因缺失的凋亡率(29.16%±18.19%)无统计学差异(P=0.584)。伴p53基因突变的CLL患者凋亡率(39.06%±17.79%)与无p53基因突变的凋亡率(26.94%±17.21%)也无统计学差异(P=0.056)。伴p53基因缺失和突变的CLL患者凋亡率(35.47%±18.53%)与无p53基因突变和缺失的凋亡率(28.77%±17.87%)无统计学差异(P=0.327)。结论:高浓度的甲泼尼龙明显抑制CLL细胞增殖,促进CLL细胞凋亡,具有剂量和时间依赖性。低浓度的甲泼尼龙对CLL细胞增殖和凋亡的影响并不明显。甲泼尼龙对CLL细胞的影响具有明显的个体差异性。p53基因正常的CLL细胞和p53基因异常(突变或缺失)的CLL细胞对甲泼尼龙诱导的凋亡无差异。本研究为大剂量甲泼尼龙治疗伴有p53基因异常的CLL提供理论依据。目的:评估大剂量甲泼尼龙(HDMP)联合利妥昔单抗(R)和新鲜冰冻血浆(FFP)治疗伴有p53基因异常的慢性淋巴细胞白血病(CLL)的临床疗效和安全性。方法:17例CLL患者均伴有p53基因异常,其中13例为复发/难治,4例为初治,接受2~6周期的HDMP-R-FFP方案治疗。治疗方案为FFP 400 mL,R 375mg/m~2第0天静脉给药。甲泼尼龙1.0g/m~2/d,第1~5天连续静脉给药。4周为一个周期。结果:17例CLL患者总有效率(ORR)和完全缓解(CR)率分别为64.71%(11/17)和17.65%(3/17)。中位随访月14(3~71)个月,中位总生存(OS)和中位无疾病进展生存(PFS)分别为15(3~71)和4(1~71)个月。13例复发/难治CLL患者的ORR和CR率分别为61.54%(8/13)和15.38%(2/13)。中位随访月14(3~71)个月,中位OS和中位PFS分别为15(3~71)和9(1~71)个月。4例初治的CLL患者,3例(75%)对治疗有反应,1例(25%)获CR。其中2例初治患者获得缓解后行异基因造血干细胞移植(Allo-SCT),至今仍存活,OS分别为62和70个月。IGHV基因无突变、复杂核型、乳酸脱氢酶(LDH)升高与无这些疾病特征的患者,ORR、PFS和OS均无显著不同。在甲泼尼龙治疗期间,6例(35.29%)患者发生Ⅱ~Ⅲ级高血糖;6例(35.29%)患者发生液体潴留;8例(47.06%)患者发生Ⅲ~Ⅳ级感染;10例(58.82%)低钙血症、3例(17.65%)低钾血症和1例(5.88%)低钠血症;1例(5.88%)出现消化道症状;1例(5.88%)发生Ⅲ~Ⅳ级骨髓抑制。结论:HDMP-R-FFP方案是治疗p53异常CLL的一个有效的和可耐受的方案。进一步巩固和挽救治疗方案需进一步探索。