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目前玉米遗传转化仅局限于少数几种材料,利用高油材料建立高效的再生体系具有重要的意义。本试验以五个优良的高油自交系GY220、GY246、GY302、GY798、GY923的幼胚为外植体,对基因型、培养基、幼胚大小、环境条件、激素配比等影响高油玉米幼胚再生的因素展开了系统研究,结果表明(1)基因型是影响胚性愈伤诱导的最主要因素,其中GY246和GY302诱导的胚性愈伤率最高,可达到100%,而GY923只有6%:(2)所有基因型材料在MB诱导培养基上的胚性愈伤诱导率最高,并且MB诱导培养基可以改良胚性愈伤;(3)幼胚大小1.5-2mm最适于诱导胚性愈伤:(4) 6-BA浓度为 6mg/L 时愈伤组织分化率最高;(5) NAA 浓度为 0.2mg/L时最适合于生根。
此外,为了建立高油玉米转化体系,并为高油玉米育种提供抗旱耐盐的亲本材料,本试验以GY246、GY302的幼胚为受体材料,根癌农杆菌EHA105为供体进行转化,该菌株携带的质粒p3301上含有目的基因SOS基因(SOS1、SOS2、SOS3)。对影响农杆菌介导幼胚的几个因素如基因型、共培养时间、共培养培养基中AgNO<,3>和抗生素的浓度展开了系统研究。结果表明GY302可以作为转化研究的材料,其最佳共培养时间为3天,共培养培养基中添加AgNO<,3>10mg/L 时可以提高侵染后幼胚的胚性愈伤诱导率,在恢复培养基中抗生素Cef浓度为250mg/L 时可以抑制农杆菌的生长。
本试验用含有15 mg/L PPT的筛选培养基对愈伤组织进行筛选培养2-3个月后,将获得的抗性愈伤组织进行分化再生,共得到43株拟转基因植株。对这些拟转基因植株进行目的基因的PCR检测,其中得16株(37.2%)呈阳性。