肝细胞性肝癌（Hepatocellular Carcinoma, HCC）是世界上最常见的恶性肿瘤之，在我国尤为严重。其具有进展速度快，恶性程度高，且易转移及复发等系列特点。肝癌的复发及转移是影响肝癌治疗效果的最主要障碍。骨桥蛋白（osteopontin,OPN）是种磷酸化糖蛋白，其表达与许多恶性肿瘤的发生和发展有着十分密切的联系。作为个和肿瘤转移密切相关的重要基因，OPN在肿瘤的治疗方面显示出广阔的前景。肿瘤的转移是个多步骤的复杂过程。间质-上皮转化（Mesenchymal-Epithelial Transition, MET）是肿瘤细胞在转移过程的后期，重塑上皮表型，表达粘附分子，从而与组织接触并整合进新器官形成转移灶的重要步骤。本课题着重探讨核型OPN调节MET促进肝癌转移的作用及其分子机理。这为将来开发抑制转移的新靶点和发展有效的治疗方案具有重要的理论指导意义。本课题利用靶向OPN的RNA干扰慢病毒和过表达OPN的慢病毒调控OPN的表达水平，研究OPN调节间质-上皮转化促肝癌细胞转移的作用。我们将肝癌细胞系用慢病毒分别下调和过表达OPN，从形态学观察，蛋白和mRNA水平检测以及免疫荧光定位等方法检测MET相关指标的变化。使用激光共聚焦技术检测各细胞系中OPN的表达定位。应用抗OPN抗体阻断细胞上清中的分泌型OPN，以及应用含有去除OPN的条件培养基培养细胞后，我们发现核型OPN诱导肝癌细胞发生MET。此外我们通过免疫共沉淀研究了OPN与HIF2a的相互作用，应用染色质免疫共沉淀探讨了HIF2a对AKT1启动子区的结合和调控，以及OPN与这种结合和调控之间的关系。此外通过小干扰RNA，微小RNA （microRNA） mimics和inhibitor转染技术，我们证明了AKT1/microRNA-429（miR-429）在核型OPN诱导的MET中发挥关键作用。裸鼠皮下移植瘤实验证明了转移过程中核型OPN的表达上调和MET的发生。尾静脉注射肿瘤转移模型证明了OPN下调对转移过程中MET的阻断。肝癌转移灶临床标本显示核型OPN表达增强，同时伴随E-钙粘素在细胞膜上的清晰表达。而在肝癌原发灶中OPN在胞浆中表达，无核型OPN表达，胞浆OPN表达水平与E-钙粘素胞膜表达成负相关。本课题的研究结果显示，核型OPN通过诱导MET促进HCC转移灶的形成。OPN可直接与HIF2a结合，阻断HIF2a对AKT1的表达抑制，促进AKT1的表达，进而使miR-429表达上调，以诱导细胞发生MET，促进远处转移的发生。本课题的意义在于我们首次发现了核型OPN在肝癌细胞中诱导MET的现象，证明了核型OPN可以通过诱导MET促进肝癌细胞转移灶的形成，为研究肝癌转移提供新的理论基础。