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长期以来在东北地区天然分布的两针松植物中,关于长白松和兴凯湖松的分类位置问题一直被许多研究者所关注,尚未形成统一的定论。本文采用PCR-RFLP和DNA测序技术研究了东北地区五种两针松(长白松、樟子松、兴凯湖松、黑皮油松和黑松)叶绿体DNA(cpDNA)的rbcL基因,根据实验结果,对长白松和兴凯湖松的分类位置以及东北地区两针松类各种间的系统演化关系进行了评价。 ①通过对两种DNA提取方法(CTAB和SDS)的比较研究,认为利用CTAB法提取两针松的DNA在质和量上都高于SDS法。 ②第一次和第二次五种两针松rbcL基因扩增的PCR产物长度均一致,五种植物几乎没有差异。说明它们rbcL基因片段长度很保守,没有基因的插入、缺失和重组的发生。 ③对五种两针松的四种限制性内切酶图谱进行了分析,结果表明:长白松、兴凯湖松和樟子松的酶谱完全一致,黑皮油松和黑松的酶谱一致。 ④在rbcL基因从481bp到864bp的片段上,长白松、兴凯湖松和赤松的碱基序列完全一致,说明三者有共同的起源。樟子松与三者相比,有一处碱基置换,黑皮油松和黑松rbcL基因的碱基序列也完全一致,它们与长白松、兴凯湖松、赤松相比有五处发生碱基置换,与樟子松相比有四处发生碱基置换。 ⑤长白松和兴凯湖松在表型特征上与赤松相近,而且二者rbcL基因的碱基序列与赤松相同,因此认为把长白松、兴凯湖松作为赤松的变种比较合适,黑皮油松和黑松根据rbcL基因碱基序列推测,它们有共同的起源,但与赤松类亲缘关系较远,二者的形态特征在演化过程中发生了较大的分异,因此各自作为独立的种是合适的。