【摘 要】
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本实验采用超声辅助乙醇溶液提取爪瓣山柑干燥果实中黄酮类化合物,通过单因素实验和响应面实验优化爪瓣山柑黄酮的提取工艺,确定其最佳提取工艺参数为:乙醇浓度60%,提取时间2
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本实验采用超声辅助乙醇溶液提取爪瓣山柑干燥果实中黄酮类化合物,通过单因素实验和响应面实验优化爪瓣山柑黄酮的提取工艺,确定其最佳提取工艺参数为:乙醇浓度60%,提取时间2.5 h,提取温度74℃,液料比27 mL/g,超声功率400W,超声时间15 min,在此条件下爪瓣山柑黄酮的平均得率为4.86 mg/g。根据静态吸附-解吸实验从三种不同类型(D101、AB-8、HPD600)的大孔树脂中选择出对爪瓣山柑黄酮纯化效果最优的树脂,结果表明AB-8大孔吸附树脂具有较好的性能,其饱和吸附量达到31.02±0.25 mg/g,吸附率71.04%±0.35%,解吸率89.24%±0.21%。聚酰胺树脂的饱和吸附量为26.39±0.47mg/g,吸附率与解析率分别为61.85%±0.38%、86.61%±0.32%。爪瓣山柑黄酮经AB-8型大孔吸附树脂富集及初步纯化后,纯度平均值由16.71%±0.63%提升到58.59%±0.49%;再经过聚酰胺树脂进一步纯化后,纯度均值又上升到82.36%±0.61%。实验表明,AB-8型大孔吸附树脂和聚酰胺树脂对爪瓣山柑黄酮有良好的吸附及纯化作用。紫外可见光扫描光谱显示,纯化后的爪瓣山柑黄酮分别在在372 nm和261 nm处有两个吸收峰,双吸收峰是黄酮类化合物的特征吸收峰。红外图谱显示爪瓣山柑提取物含有黄酮类化合物的特征吸收峰。结合高效液相色谱技术和液质联用技术发现纯化后的爪瓣山柑黄酮有3种含量最高的黄酮单体,分别为山奈酚、芦丁和槲皮素。爪瓣山柑黄酮的抗氧化活性和抗肿瘤活性均由体外实验测定。抗氧化活性实验主要由DPPH实验、ABTS实验和还原力实验构成,当爪瓣山柑黄酮浓度为1.0mg/mL时,其对DPPH自由基和ABTS自由基的清除率最高分别达到84.79%和90.08%,而且爪瓣山柑黄酮的浓度与清除自由基的能力及还原力强弱呈现出正相关关系。MTT实验表明,爪瓣山柑黄酮对A549细胞的抑制率随着浓度的增加而增加,当浓度为150 μg/mL时抑制率最高达到42.56%。爪瓣山柑黄酮抑制A549细胞生长率50%时药物浓度平均为193.19 μg/mL,即IC50=193.19±0.83 μg/mL。体外活性实验表明,爪瓣山柑黄酮具有具有较好的抗氧化活性和抗肿瘤活性。
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