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胃癌是最常见消化道恶性肿瘤,在中国、日本及韩国尤为高发,由于大多数胃癌患者在确诊时已是疾病晚期,化疗是其最主要治疗手段之一。在临床中,以铂类为主的联合化疗是晚期胃癌化疗一线治疗药物,具有较高疗效,被广泛应用。但是,胃癌对铂类耐药是晚期胃癌化疗失败的重要原因。尽管,近年来对铂类耐药的研究很多,但仍然缺乏一种在化疗前能够评价胃癌化疗敏感性的指标。核糖核苷酸还原酶(RNR)是将核糖核苷酸转化为脱氧核糖核苷酸的唯一酶,在细胞DNA合成及修复中具有重要的作用,核糖核苷还原酶1(ribo nucleotide reductase 1, RRM1)为核糖核苷酸还原酶3大亚基之一。RRM1高表达促进肿瘤的增殖和转移,在进展期非小细胞肺癌患者中提示预后不良,但在可行手术的早期肺腺癌中,则提示更长的生存期。迄今为止,RRMl的表达水平在胃癌中与铂类化疗药物的关系的研究还相对较少。本研究,采用基因沉默技术使胃癌AGS细胞中RRM1基因的表达水平下调,从抗药性角度分析其低表达是否其为对奥沙利铂敏感的指标。目的：研究RRM1低表达对胃癌细胞奥沙利铂敏感性的影响；探讨RRM1表达水平与胃癌细胞对奥沙利铂耐药关系。1方法：1.1培养胃癌细胞系AGS细胞。1.2人工构建RRM1 siRNA1、RRM1 siRNA2、RRM1siRNA3三条特异性干扰片段。1.3采用脂质体介导转染技术分别将三条干扰片段(RRM1 siRNA1、RRM、 siRNA2、RRM1siRNA3)转染入三组胃癌AGS细胞,以此干扰片段转染组为实验组,空白干扰片段转染组为阴性对照组,以未转染组(本底细胞)为空白对照组。1.4采用RT-PCR技术检测实验组、阴性对照组、空白对照组胃癌AGS细胞RRM1基因mRNA表达水平。并挑选出实验组中RRM1特异性干扰片段干扰效果效果最佳的一组用作以下实验。1.5采用western blotting技术检测上述实验组、阴性对照组和空白对照组的RRMl蛋白表达相对量。1.6用终浓度为0.2μmol/L、0.8μmol/L、1.6μmol/L、3.2μmol/L、20μmol/L 100μmol/L的奥沙利铂分别处理实验组、阴性对照组及空白对照组胃癌AGS细胞24小时,然后用CCK-8实验检测各组细胞在不同浓度下的细胞抑制率并计算各组细胞IC50。1.7用终浓度为3μmol/L的奥沙利铂分别处理实验组、阴性对照组及空白对照组胃癌AGS细胞24小时,用流式细胞学检测并计算出各组细胞在该浓度下的凋亡率。1.8用软件SPSS17.0处理上述数据,用统计学方法分析RRM1表达水平降低是否与胃癌细胞对奥沙利铂敏感有关。2结果：2.1与空白干扰片段转染组(阴性对照组)及未转染组(空白组)胃癌AGS细胞相比,实验组RRM1基因mRNA及蛋白表达水平明显下调(p<0.05),且实验组RRM1 siRNA3干扰效果最佳,将RRM1 siRNA3实验组用于以下实验。2.2用0.2μmol/L、0.8μmol/L、1.6μmol/L、3.2μmol/L、20μmol/L、100μmol/L等不同浓度奥沙利铂处理实验组、阴性对照组及空白对照组胃癌AGS细胞24小时,根据CCK-8检测的实验结果计算出奥沙利铂对实验组、空白对照及阴性对照组胃癌AGS细胞IC50(半数抑制浓度)分别为：3.34μmol/L、5.85μmol/L、5.13μmol/L (p<0.05)。2.3用3μmol/L奥沙利铂处理实验组、阴性对照组及空白对照组胃癌AGS细胞24小时后,凋亡率分别为(35.84±2.0)%、(27.32+2.6)%、(28.26：a：1.5)%(p<0.05)。3结论：3.1 RRM1 siRNA干扰片段转染能使胃癌AGS细胞mRNA表达水平下调及蛋白相对表达量减少；3.2 RRM1高表达可能是胃癌对奥沙利铂耐药的指标之一,下调RRM1基因可增加胃癌细胞对奥沙利铂敏感性,为临床减少奥沙利铂用量提供理论依据。