抗类风湿民族药荨麻化学成分及其抗炎免疫活性研究

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荨麻Urticae fissae Herba为荨麻科植物荨麻Urtica fissa E.Pritz.的干燥全草。荨麻药用历史悠久,具有祛风除湿、温肾消食之功效,我国多个民族用其水煎液治疗类风湿性关节炎、糖尿病、皮肤湿疹等疾病。然而,对于荨麻抗类风湿的现代研究薄弱,缺乏系统的化学成分研究,活性成分尚不清楚,缺乏质量控制指标。因此,研究荨麻抗类风湿作用的物质基础,具有非常重要的意义。本实验室前期研究发现荨麻具有很好的抗风湿作用。本课题拟在前期研究基础上,进一步对荨麻的化学成分进行系统研究;并通过体外活性实验确定荨麻抗类风湿性关节炎及免疫活性成分,以期为进一步研究奠定基础。荨麻化学成分研究:采用硅胶柱层析、大孔树脂、凝胶柱层析、ODS反相柱层析,结合半制备高效液相色谱法,从荨麻乙醇提取物中分离鉴定了38个成分,分别为:Urticin A(1),Urticin B(2),Urticin C(3),Urticin D(4),Urticin E(5),Urticin F(6),Urticin G(7);cordyrrole A(8),3-己烯二酸单甲酯(9),硬脂酸(10),甘露醇(11),香草酸(12),5-羟基-2-羟甲基-吡啶(13),大叶丙内酯E(14),尿嘧啶(15),槲皮素(16),臭矢菜素A(17),咖啡酸(18),绿原酸(19),对羟基苯甲醛(20),ficusol(21),文殊兰新碱(22),2-[甲酰基-5-(甲氧基甲基)-1-氢-吡咯-1-基]丁酸丙酯(23),2-[甲酰基-5-(丁基醚甲基)-1-氢-吡咯-1-基]丁酸丁酯(24),4-[甲基-5-(甲氧基甲基)-1H-吡咯-1-基]丁酸(25),2-[甲酰基-5-(甲基丁基醚)-1-氢-吡咯-1-基]丁酸甲酯(26),2-[甲酰基-5-(甲氧基甲基)-1-氢-吡咯-1-基]丁酸丁酯(27),lobechine(28),赤藓醇(29),甲基β-D-吡喃半乳糖苷(30),(6R,9R)-长寿花苷(31),荨麻醇-7-O-β-D-葡萄糖苷(32),二(4-羟基苯基)甲醇(33),松脂素单甲基醚-4-O-β-D-葡萄糖苷(34),山奈苷(35),腺苷(36),capparisine A(37),capparisine B(38)。其中,化合物1-7均为新化合物,化合物8、9、11-14、17、20-35、37、38共25个化合物均为首次从荨麻中分得。荨麻抗炎活性研究:采用MTT法检测荨麻乙醇提取物的不同极性部位及单体化合物对RAW264.7细胞增殖作用的影响,采用Griess法测定荨麻乙醇提取物的不同极性部位对LPS诱导的RAW264.7细胞培养液上清中NO含量的影响。结果发现:(1)荨麻乙醇提取物的各极性部位提取物以及各单体化合物对RAW264.7细胞毒性均较小,对LPS诱导RAW264.7的细胞培养液上清中NO的抑制作用较为明显;(2)荨麻乙醇提取物中,随萃取极性的增强,其对细胞毒性作用减小,对NO抑制作用降低;(3)生物碱类化合物、糖苷类化合物、木脂素类化合物显示较为显著的抗炎活性。结果证明荨麻具有一定的抗炎活性,以达到抗类风湿性关节炎的作用。荨麻抗补体活性研究:采用经典途径测定荨麻乙醇提取物不同极性部位的抗补体活性。经过补体效价评定,不同极性部位抗补体活性结果为:非极性部位较强,极性部位较弱,且各极性部位均具有良好的抗补体活性。这提示荨麻可通过抗补体活性来实现其抗类风湿性关节炎作用。本课题首次对荨麻进行了系统的化学成分研究、抗炎抗补体活性研究,分离鉴定38个化合物,其中新化合物7个,具有抗炎活性成分的化合物7个;首次从荨麻中分离的化合物25个,初步阐明荨麻抗类风湿性关节炎的活性成分,为荨麻的进一步研究提供了科学依据。
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