多酚是一类可以帮助动植物抵抗逆境的重要次生代谢产物。在茶树中多酚糖苷是组成多酚化合物的主要成分。本文克隆了一条茶树多酚糖基转移酶基因,并利用重组蛋白技术对基因功能进行分析。体外酶活检测结果表明该重组蛋白不仅表现出了底物的多样性,而且还具有催化位点多样性。本论文主要研究结果如下:1.利用全长克隆技术得到一条多酚糖基转移酶基因并且被命名为CsUGT72AM1,此基因全长为1416 bp,编码了 472氨基酸残基,等电点为5.21。通过系统进化树分析,CsUGT72AM1被分在Cluster III b组,位于AtUGT72E1和LjUGT72Z2之间,推测该糖基转移酶具有催化类黄酮或木质素的形成糖苷功能。2.以茶树枝条不同时期的叶片cDNA为模板,利用荧光定量技术对CsUGT72AM1进行组织特异性表达分析。结果表明,CsUGT72AM1在老叶中高表达,在幼叶中低表达。另外,以不同光诱导处理茶树枝条cDNA为模板,对该基因诱导表达特异性进行分析。结果显示,CsUGT72AM1在蓝光和紫外诱导下有显著上调,而在红光和黑暗变化不明显。利用LC-MS对同光照处理的样品进行黄酮醇糖苷和木质素检测,结果显示黄酮醇糖苷和木质素在蓝光诱导下均有增加。3.本文构建了 pMAL-C2x-CsUGT72AM1重组质粒,开展了 CsUGT72AM1体外酶活研究。结果表明,rCsUGT72AM1表现出底物的多样性,不仅能催化类黄酮形成糖苷,还能催化木质素形成相应糖苷。另外,利用核磁技术对柚皮素的产物进行进一步分析,表明rCsUGT72AM1以柚皮素为底物,分别形成7位和4’位糖苷,具有催化位点多样性。4.酶动力学结果显示,rCsUGT72AM1对柚皮素的亲和力最高,Km为28.68。在催化效率上,该重组蛋白对圣草酚和肉桂醛表现出了很高的催化效率,Kcat/Km 分别为 548 s-1.M-1 和 224 s-1.M-1。