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原发性胰腺癌是临床表现隐匿、进展迅速、预后较差恶性度较高的肿瘤,其预后极差、生存率极低。其生物学特点是:易侵犯神经、血管、淋巴结及转移率高,加之解剖位置深在、隐蔽及缺乏特异性标记物和早期缺乏特异性症状等特点,易发生胰腺癌复发和转移。临床上确诊时75%以上患者已属中晚期,胰腺癌的手术切除率低,对化疗、放疗不敏感,总的术后5年生存率仍在5%左右[1]。在胰腺癌手术治疗、化疗以及放疗等综合治疗后,预测肿瘤复发与转移、评估胰腺癌的预后是提高胰腺癌生存率的关键所在。要解决此问题必须建立能预测胰腺癌治疗后的转归以及复发转移的特异性的指标,从而进一步改善和评价胰腺癌治疗效果。目前国内对原发性胰腺癌研究主要集中在胰腺癌的早期诊断和治疗方面,诊断胰腺癌与评价胰腺癌预后均无特异性的肿瘤标记物。关于胰腺癌转移复发以及预后方面的研究尚处于刚刚起步阶段。有关与胰腺癌转移复发以及预后方面的肿瘤标记物研究价值初见端倪。Heparanase基因(以下简写Hpa)编码一种哺乳动物β-D葡萄糖内切糖苷酶.目前研究发现存在Hpa1和Hpa2两种同功异构体。由于细胞外基质(extracellular matrix,ECM)由蛋白核心和硫酸肝素(HS)侧链构成,尤其是基底膜的主要组成成分。Hpa1基因编码蛋白酶降解硫酸肝素(HS),从而导致ECM重建以及参与重要生物过程如血管生成、肿瘤转移。Hpa1通过降解HSPG和其他蛋白水解酶协同作用激活纤溶酶原、活化间质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMPs),同时作为bFGF、VEGF等促进因子的辅助受体等促进肿瘤血管、淋巴管的生成从而促进肿瘤转移与复发。由此表明Hpa1表达量与肿瘤潜在浸润、肿瘤转移能力具有密切的相关性[2]。现在研究表明,Hpa1能促进肿瘤癌血管与淋巴生成,进而促进肿瘤浸润与转移[3]。Hpa1在评估肿瘤的侵袭力与肿瘤转移能力有一定的价值。本研究通过Hpa1在胰腺癌中表达定量分析以及Hpa1表达与临床病理资料相关性分析,探讨Hpa1对胰腺癌淋巴生成、血管生成、浸润侵袭、转移复发的影响以及可能的作用机制,为胰腺癌的预后复发提供新的理论依据,进一步探寻预测胰腺癌复发和预后的指标。目的:本研究采用实时定量RT-PCR、Western-Blot实验、分子免疫组组织化学定量检测胰腺癌组织中Hpa1 mRNA和Hpa1蛋白,同时利用免疫双夹心法检测胰腺癌术前外周血中的Hpa1含量,定量分析Hpa1 mRNA和Hpa1蛋白在胰腺癌、癌旁组织中表达并探讨与胰腺癌的临床病理分期、淋巴生成、血管生成、胰腺癌浸润侵袭能力以及转移复发相关性.从而为预测胰腺癌转移复发和评估胰腺癌预后提供实验理论依据。方法:(1)实时定量RT-PCR实验:检测胰腺癌组织中Hpa1 mRNA的表达。(2)免疫组化:检测胰腺癌组织中Hpa1蛋白的表达及其分布,以及胰腺癌血管生成和淋巴生成。(3)Western-Blot实验:分析胰腺癌中Hpa1蛋白定量分析。(4)ELISA实验(双夹心法):检测胰腺癌患者术前外周血的Hpa1的蛋白含量与胰腺癌临床病理以及术前CA199的相关性。(5)收集以上病例的临床病理资料以及进行3月-2年的随访。结果:(1)Hpa1mRNA在胰腺癌中表达为23.53±4.13.是正常胰腺表达5.76±2.28倍.是癌旁组织的1.39±0.54倍(p<0.05)。Western印迹检测发现正常胰腺组织Hpa1蛋白表达为0.36±0.14 ,胰腺癌旁组织为1.21±0.37 ,胰腺癌组织为1.76±0.28(p<0.05)。37例胰腺癌中Hpa1表达阳性率分别为64.9%(24/37),且在胰腺癌、癌旁组织、正常组织表达呈下降趋势。(2)原发性胰腺癌组织中Hpa1表达与胰腺癌TNM分期、累及神经和血管情况、包膜完整性以及淋巴转移有关(p<0.05),但是与患者年龄、性别、组织学分化程度、肿瘤大小无关(p>0.05)。(3)Hpa1表达与胰腺癌浸润侵袭程度、术后转移复发呈正相关性(P<0.05), Hpa1通过促进胰腺癌淋巴生成与血管生成途径促进胰腺癌浸润转移复发。(4)外周血Hpa1与胰腺癌临床病理以及胰腺癌转移具有相关性,采用Pearson相关检验发现与术前CA199肿瘤标记物具有正相关性(R=0.792,p<0.001)。结论:(1) Hpa1与胰腺癌发生、发展密切相关,与胰腺癌的临床分期、胰腺浸润指数、以及淋巴转移密切相关,Hpa1有望成为胰腺癌抗淋巴道转移的治疗的靶蛋白。(2) Hpa1表达与胰腺癌浸润侵袭程度、术后转移复发呈正相关性,可能通过促进胰腺癌淋巴生成与血管生成促进胰腺癌浸润转移复发。(3) Hpa1可以作为预测胰腺癌转移、术后转移复发的指标。