超声强化超临界CO2提取复方川芎丹参及其提取物药效研究

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随着人类寿命的延长和人口的老龄化日趋严峻,骨质疏松症(Osteoporosis,OP)已经成为一种常见病,严重危害人类健康。心血管疾病(Cardiovascular disease, CVD)也是当今世界上威胁人类最严重的疾病之一,其发病率和死亡率已超过肿瘤而跃居世界第一。川芎和丹参都是我国资源丰富的中草药,两者已广泛应用于各种疾病的治疗。但传统中药提取技术普遍存在提取效率低、环境污染和有机残留的问题,影响了天然产物有效成分的开发利用。本课题利用超声强化超临界CO2提取技术对复方川芎丹参有效成分进行提取,考察提取物得率、阿魏酸、川芎嗪和丹参酮IIA提取率等多指标,得到超临界CO2提取(SCE)和超声强化超临界CO2提取(USCE)复方川芎丹参有效成分最佳工艺参数,并研究提取物对骨质疏松症模型的药效。通过单因素和正交试验得出SCE最佳提取工艺为提取压力为25MPa,提取温度55℃,原料粒度为60目,夹带剂用量为1.0mL/g。在此条件下对复方川芎丹参提取2h,提取物得率2.84%(RSD=1.53%,n=3),对提取物依法测定,得川芎嗪、阿魏酸和丹参酮IIA提取率分别为125.74μg/g(RSD=0.84%,n=3)、367.66μg/g(RSD=1.23%,n=3)和131.31μg/g(RSD=0.81%,n=3)。通过正交试验设计,得出USCE影响因素作用主次为提取压力>提取时间>提取温度>超声功率密度。最优提取组合为提取压力为19MPa,提取温度35℃,超声功率密度120 W·L-1,提取时间1h,在这提取条件下提取,提取物得率达到3.85%(RSD=1.76%,n=3),川芎嗪、阿魏酸和丹参酮IIA的提取率分别为150.64μg/g(RSD=0.99%,n=3)、425.33μg/g(RSD=2.09%,n=3)和203.65μg/g(RSD=2.36%,n=3)。不同提取方法提取复方川芎丹参有效成分研究结果表明:USCE法优于SCE法和有机溶剂浸提法,复方合提比单方分提效果好,且复方的提取物得率和各活性成分含量并不是两单方的简单加和值,而是大于其加和值。SCE和USCE提取复方川芎丹参的动力学模型分别为Y = 3.10938×(1-e-0.76942×t)和Y = 3.89091×(1-e-1.32226×t)。5000倍电镜观察物料发现,SCE和USCE均能有效破坏物料的表面结构,出现浮涨和内凹现象,破坏原料表面致密结构,超声的加入更能促进原料表面平整结构的撕裂,使其结构更加疏松,出现阶梯式片层结构,并在原料表面出现孔洞,进一步证明了超声高效的提取强化能力。复方川芎丹参提取物药效研究结果显示不同浓度川芎、丹参及复方川芎丹参的USCE提取物对促UMR 106细胞增殖和分化的效果不同。当浓度都为0.1μg /mL时,三种药物的效果相近,促UMR 106细胞增殖效果缓慢。当浓度为1.0μg /mL时,三种药物UMR 106细胞增殖率与正常对照组对比均有显著差异性。当浓度为10.0μg /mL时,复方川芎丹参USCE提取物在促UMR 106细胞增殖的效果上体现了比川芎、丹参USCE提取物更明显的效果,差异性为极显著。当浓度达到100.0μg /mL时,川芎、丹参USCE提取物显示会抑制细胞增殖,而复方川芎丹参USCE提取物能促细胞增殖。当浓度为中等浓度(10μg /mL)时,丹参和复方均显示了促进UMR 106细胞分化作用。当浓度达到高浓度(100μg /mL)时,三种USCE提取物都具有促进UMR 106细胞分化的药效作用,且统计学差异性为极显著。
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