琼寡糖益生元效果及其对肠道菌群影响作用研究

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琼胶是一种水溶性多糖,广泛应用于食品、医药及日用化工行业。在食品中,琼胶可作食品胶凝剂、稳定剂和增稠剂,可以提高食品黏度、使食品黏滑;在医药中,琼胶主要用作微生物培养基。琼寡糖作为琼胶的降解产物,其水溶性较好,具有较好的抗氧化活性,有利于人体吸收,提高人体免疫力。本论文以琼寡糖为研究对象,以琼寡糖益生元效果及其对肠道菌群影响为主要目的,采用琼胶酶酶解和盐酸酸解琼脂制备不同聚合度的琼寡糖;研究酶制琼寡糖和酸制琼寡糖的抗氧化活性清除效果和益生元效果的差异;选择对益生菌生长效果最好的琼寡糖进行喂养试验和体外发酵试验。以明虾肠道内容物为接种物,涂布于选择培养基上,进行菌种计数。在培养基中添加琼寡糖,从中挑选出有促生长作用的菌种,进行16s rRNA基因序列分析,并构建系统发育树确定菌种。首先,根据琼胶酶和盐酸水解时间的不同制备不同聚合度的琼寡糖。并对不同聚合度的酶制寡糖和酸制寡糖分子结构进行质谱分析,基于结构的不同,对寡糖的抗氧化能力进行了研究。结果发现,酶制寡糖和酸制寡糖都有一定的抗氧化能力。其中还原能力最好的为聚合度DP5的酶法寡糖和DP3的酸法寡糖。对DPPH自由基的清除能力最好的均为DP5的寡糖。对ABTS+自由基的清除能力最好的均为DP3的寡糖,在15~35 mg/m L浓度范围内,清除率可达99%以上。DP8的酸法寡糖对·OH和·O2-清除能力都高于其他寡糖,在35mg/m L的浓度时,清除率分别为38.79%和44.3%。其次,在琼寡糖生物活性测定的基础上,研究不同聚合度的酸法和酶法琼寡糖对保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌、枯草芽孢杆菌和大肠杆菌的生长作用。研究发现,酶法琼寡糖能促进保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌的生长,酸法琼寡糖可以促进枯草芽孢杆菌生长。选择对益生菌生长效果最好的琼寡糖,即DP3的酶法琼寡糖进行喂养试验。测定鳌虾的生长指标,在体长增长率、体重增长率、饲料转化率、特定生长率等方面,寡糖组的指标明显超过对照组,这说明寡糖有促进龙纹鳌虾生长的作用。通过体外发酵测定产气量、pH值、氨氮的浓度。最后,以明虾肠道内容物为接种物,匀浆后涂布于选择培养基上,进行菌种计数,其中好氧菌主要包括大肠杆菌和副溶血性弧菌,还有极少的条件致病菌金黄色葡萄球菌。厌氧菌主要为乳酸菌和双歧杆菌,还有少量产气荚膜梭菌。再将琼寡糖添加到选择培养基上,通过与原培养基上菌落数量和形态进行比较,发现营养琼脂培养基上菌株的数量和菌落形态都有明显变化。从中挑选出有促生长作用的菌种11、31、41、61,进行16s rRNA基因序列分析,并构建系统发育树。初步判定菌种11为副溶血性弧菌,菌种31为溶藻弧菌,菌种41为溶藻弧菌,菌种61为副溶血性弧菌。对鉴定后的单菌进行琼寡糖对其生长影响的试验,菌株11和菌株31相比对照组分别增加了15.2%和19.5%,说明琼寡糖对菌株11和菌株31有明显的促生长作用。
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