中药鹅不食草提取物对人鼻咽癌细胞CNE-1增殖抑制和凋亡诱导作用的研究

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中药鹅不食草系菊科(Asteraceae)石胡荽属(Centipeda)植物鹅不食草(Centipeda minima (L.) A. Br. et Aschers.)的干燥全草,用于治疗鼻炎。鼻咽癌多发于我国南方地区,尤其是广东省,因其恶性程度较高,尚无对其有效的治疗药物和方法。文献记载鹅不食草有抗鼻咽癌的功效,但目前的研究主要侧重临床实例报道,对其作用机制尚无系统研究,本论文对鹅不食草提取物体外和体内抗鼻咽癌活性进行了研究,并对其作用机制进行初步探讨:(1)通过MTT法对鹅不食草水提物和醇提物进行抗鼻咽癌活性筛选,研究发现乙醇提取物(CME)在16.4~50μg/mL浓度范围内对人鼻咽癌CNE-1细胞表现出明显的抑制作用,并呈明显的时间-剂量依赖关系。进一步研究表明CME的石油醚和乙酸乙酯部分具有明显的活性,为有效部位。(2)利用Hoechst33258荧光染色法和流式细胞术Annexin V FITC/PI染色法对CME抑制CNE-1细胞增殖机制进行初步探讨,研究表明,CME对CNE-1细胞具有明显的凋亡诱导作用,并有明显的时间依赖性。(3)流式细胞术PI染色法检测CNE-1细胞周期变化,结果表明CNE-1细胞周期阻滞在G2/M期,并呈现明显的时间剂量依赖性。(4)利用蛋白免疫印迹(Western blot)方法,对CME诱导CNE-1凋亡的作用机制进行了进一步探讨,研究表明,CME作用于CNE-1细胞后:a.胞内DNA修复酶PARP含量明显减少,其水解产物之一Cleaved-PARP含量明显增加。b.胞质中细胞色素c和主要的凋亡通路相关蛋白Caspase3、Caspase9、Caspase8显著上调。c. Procaspase3、Procaspase9、Procaspase8含量均有所减少。d.Bcl-2蛋白家族中抗凋亡蛋白Bcl-2显著下调,而促凋亡蛋白Bax明显上调,Bax/Bcl-2比例明显上调。上述结果表明鹅不食草可以通过周期阻滞和凋亡诱导来抑制CNE-1增殖,主要的凋亡分子机制可能与内外两条凋亡通路的激活有关。(5)通过建立人高分化鼻咽癌CNE-1裸鼠皮下移植瘤模型并进行不同的药物处理后,发现CNE-1成瘤率较高,达100%;鹅不食草高、低剂量给药组裸鼠平均瘤重和体积无明显变化,而阳性对照组平均瘤重和瘤体积明显减少,抑制率为72.77%。上述结果表明鹅不食草体内抑瘤效果不明显。
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