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目的:化学治疗是中晚期胃癌患者治疗的主要手段。但是，由于肿瘤耐药的发生，化疗药物的疗效不能够有效发挥。土槿皮乙酸(Pseudolaric acid B，PAB)是从土槿皮——松科植物金钱松(Pseudolarix kaempferi Gorden)的干燥根皮或近根树皮中分离出的新型二萜酸化合物。研究表明PAB可抑制胃癌、肝癌、结肠癌等肿瘤细胞增殖、诱导细胞周期阻滞及细胞凋亡，同时发现其能够逆转P-gp介导的肝癌耐药株QGY-TR50细胞的化疗耐药作用，并抑制肝癌耐药株裸鼠移植瘤的生长;同时其也能够抑制结肠癌耐药细胞增殖，对抗结肠癌细胞对5-FU耐药性。本课题组前期实验研究证实PAB具有逆转胃癌化疗耐药作用，本实验研究将进一步深入探讨PAB逆转胃癌耐药的分子机制，并关注其对多药耐药基因的影响。 研究方法:1、MTT法检测细胞增殖抑制率。收集处于对数生长期SGC7901及SGC7901/ADR细胞，调整细胞悬液浓度后接种于96孔板，细胞贴壁后，实验组加入不同浓度的ADR，对照组加等量不含药物的培养基，并设立调零孔。继续培养24h后，MTT法检测各孔吸光度值（OD值），计算ADR对两种细胞的增殖抑制率。2、免疫细胞化学检测MRP1蛋白的表达。人胃癌多药耐药SGC7901/ADR细胞爬片，细胞贴壁后分为以下各组:PAB组、ADR组及PAB联合ADR组，同时设立不加药物处理的SGC7901/ADR细胞对照组，各处理因素作用24h后，4％多聚甲醛固定，以免疫细胞化学法检测各组细胞内MRP1的表达，显微镜下观察染色效果，显微镜下(×400)摄片。3、Western blot方法检测MRP1、AKT、p-AKT、GSK3β、p-GSKβ蛋白的表达。将SGC7901/ADR细胞分为PAB、ADR及PAB联合ADR组，同时设立不加药物处理的SGC7901/ADR细胞对照组，各处理因素作用24h后，收集细胞，提取蛋白，用Western blot方法检测MRP1、AKT、p-AKT、GSK3β、p-GSKβ蛋白的表达水平。4、Real-Time PCR法检测MRP1mRNA、MDR1mRNA的表达水平。以不同浓度PAB作用于人胃癌耐药细胞SGC7901/ADR，同时分别设立不加药物的SGC7901及SGC7901/ADR细胞组，收集细胞，提取RNA，进行RNA反转，cDNA扩增，确认Real-Time PCR的扩增曲线和溶解曲线，记录CT值，采用2^-△△Ct法公式计算倍数。5、统计学处理。本实验所有数据均用均数±标准差表示，采用SPSS21.0分析软件进行数据处理，两样本均数比较应用t检验，多个样本均数比较采用方差分析(One-Way ANOVA)，P＜0.05具有统计学意义。 结果:1、胃癌MDR细胞系的确认。MTT法检测ADR化疗药对SGC7901/ADR细胞和SGC7901细胞的增殖抑制作用，发现ADR对SGC7901/ADR细胞和其亲本SGC7901细胞的抑制作用有显著差异(P＜0.05)，提示SGC7901/ADR细胞具有多药耐药属性。2、免疫细胞化学检测MRP1的表达水平。免疫细胞化学检测PAB、ADR、PAB联合ADR对SGC7901/ADR细胞中MRP1的表达影响，结果显示对照组细胞中的MRP1高表达，染色呈棕黄色，PAB组中的MRP1表达略下降，ADR组中可见MRP1表达下调，PAB联合ADR给药组中可见MRP1的表达显著下调，染色呈浅黄色。3、Western blot检测MRP1、AKT、p-AKT、GSK3β、p-GSKβ蛋白的表达。Western blot检测 PAB、ADR及两者联合给药对SGC7901/ADR细胞中各种蛋白表达水平的影响，结果显示与对照组相比MRP1、p-GSKβ、p-AKT蛋白的表达水平在PAB组、ADR组及PAB联合ADR组中均依次下调(P＜0.05)，而AKT、GSK3β的表达水平未见明显改变，差异不具有统计学意义(P＞0.05)。4、Real-Time PCR法检测不同浓度PAB作用下耐药细胞MRP1mRNA、MDR1mRNA的表达水平。结果显示，与SGC7901细胞相比，胃癌耐药系SGC7901/ADR细胞高表达耐药基因MDR1及MRP1(P＜0.05);且给予不同浓度PAB(5μ mol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L)作用于胃癌耐药细胞后，与未加药物处理的SGC7901/ADR对照组相比，随着PAB作用浓度增加，耐药基因MDR1及MRP1的基因表达在各组中均依次下调，各处理组间差异具有统计学意义(P＜0.05)。 结论:PAB通过作用于MRP1分子达到逆转胃癌化疗耐药作用;其逆转胃癌化疗耐药作用可能与对p-AKT、p-GSK3β分子的调控有关。