乙肝病毒X蛋白通过激活c-myc诱导肝卵圆细胞恶性转化的研究

来源 :第三军医大学 | 被引量 : 1次 | 上传用户:xiaowangjianfeng
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研究背景肝癌目前已经成了严重威胁人类健康和生命的重大疾病。由于肝癌有起病隐匿、发展快等特点,很多临床确诊患者已属晚期。因此,深入探讨肝癌发生及发展的原因已经成为了医学上的热门方向。我们前期的研究已经证实了乙型肝炎病毒X蛋白可以诱导肝卵圆细胞发生恶性转化,那么HBx蛋白又是如何引起肝卵圆细胞恶性转化,联系两者之间的“桥梁”又是什么,这已经成为我们一个亟需解决的问题。目的研究HBx蛋白对c-myc表达的影响;探讨c-myc特异性siRNA对乙型肝炎病毒X蛋白(Hepatitis B virus X, HBx)诱导卵圆细胞恶性转化的影响。方法通过HEK293T细胞扩增腺病毒获得高滴度的Ad-EGFP和Ad-HBx,分别感染肝卵圆细胞株WB-F344细胞,获得稳定表达HBx的WB-F344-HBx细胞,通过RT-PCR和Western blot检测其与对照组WB-F344-Mock和WB-F344-EGFP两组细胞的c-myc的表达的差异,验证HBx蛋白对c-myc表达的影响。应用特异性对应c-myc基因的siRNA转染各组细胞,运用体外成瘤法、流式细胞术、细胞迁移等实验,观察c-myc特异性siRNA对HBx诱导卵圆细胞恶性转化的影响。结果与转染了空白对照组WB-F344-Mock和WB-F344-EGFP的细胞相比,转染了HBx的实验组WB-F344-HBx,细胞中的c-myc在RNA及蛋白水平的表达明显增高。细胞在c-myc基因沉默前,WB-F344-HBx细胞G0/G1期细胞比例显著降低、S期细胞比例显著升高;第1d3组细胞都以单细胞形式悬浮生长,随着时间延长,WB-F344-HBx细胞逐渐形成致密的细胞球体并且数量逐渐增多、体积逐渐增大;WB-F344-HBx细胞的迁移能力显著高于对照组,WB-F344-Mock和WB-F344-EGFP组之间各项指标均无明显差异;而c-myc基因沉默后,WB-F344-Mock、WB-F344-EGFP和WB-F344-HBx三组细胞间各项指标均无明显差异。结论乙型肝炎病毒X蛋白通过激活c-myc基因从而诱导肝卵圆细胞的恶性转化。
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