Wnt4(Wingless-related MMTV integration site4,无翅相关的小鼠乳房肿瘤病毒整合位点4)是Wnt家族重要的成员之一,Wnt蛋白是一种分泌型糖蛋白,通过自分泌或旁分泌作用,它们组成一个高度保守的信号分子家族。Wnt通路决定细胞的分化命运,在动物发育中起着广泛的作用；而近来研究发现,Wnt信号通路在生殖系统中也起着重要的作用,与生殖最相关的可能是非典型的Wnt/β-catenin信号通路。因此,对Wnt4基因的克隆测序和初步分析,可以为研究猪的Wnt4基因的生物学功能和品种改良提供基础的基因信息。本文采用电子克隆的方法,结合RT-PCR和RACE技术,获得了猪Wnt4基因的cDNA全序列。利用生物信息学方法预测了该蛋白的结构和功能,并进行了同源序列多重比对和分子系统发生分析。利用实时荧光定量(Real-time) PCR技术分析了猪Wnt4基因的mRNA在不同组织的相对表达水平。1Wnt4基因的克隆测序用人的Wnt4基因的cDNA全序列作为电子探针,分别从NCBI的dbEST和UniGene数据库钓取了共5条猪的EST序列,将其输入DNAstar-SeqMan程序,最后拼接出2个重叠群(Contig)序列。在此基础上,利用Oligo6.0软件手动设计引物,借助RT-PCR和RACE技术一方面验证了电子克隆的正确性；另一方面扩增出cDNA全序列,长度为3232bp, GenBank登录号为FJ759131。2Wnt4蛋白的生物信息学分析借助生物信息学网络资源和软件,预测出猪Wnt4基因开放阅读框的长度为1254bp,编码417个氨基酸残基,且两侧分别是260bp的5’UTR和1718bp的3’UTR。通过对蛋白序列相似性检索,预测出猪Wnt4蛋白含有一个信号肽,为分泌性蛋白质；不含明显的疏水区；定位于细胞外。而且确定其含有Wnt4结构域。推测猪Wnt4蛋白参与细胞的分化、发育和繁殖等过程。3Real-time PCR分析Wnt4基因的组织表达谱利用Real-time PCR技术对猪各组织的Wnt4基因的mRNA进行定量分析,基因表达量使用2-△△CT法进行处理,其中ΔΔCT=(CT目的基因-CT内参基因),处理结果使用SPSS16.0进行单因素方差分析。结果表明：Wnt4基因在猪的不同组织中广泛表达,但Wnt4基因在体内各组织中的表达丰度有差异,已证实该基因最初表达于肾小管间充质及未分化的性腺中。但经过性别特异的分化后,在雄性性腺中Wnt4表达下降。Wnt4的缺失对雄性动物的睾丸发育是不受影响的。而在雌性性腺中一旦缺失Wnt4信号,其结构和功能上都呈现一定的雄性化特征。在卵巢组织表达水平较高于其它组织,推测Wnt4基因在猪卵巢组织的发育和功能维持过程中具有重要作用。